| 研究課題/領域番号 |
07457134
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
消化器内科学
|
|---|
| 研究機関 | 大阪大学 |
|---|
研究代表者 |
川野 淳 大阪大学, 医学部, 助教授 (60133138)
|
|---|
| 研究分担者 |
竹井 謙之 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員
辻 晋吾 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員
永野 公一 大阪大学, 医学部, 助手 (60237542)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
|
| キーワード | 消化管粘膜 / 増殖 / 分化 / 癌化 / 3次元培養 / 上皮間質相互作用 / 増殖因子 |
|---|
| 研究概要 |
1) 3次元培養による消化管粘膜組織培養モデルの開発 消化管は多様な細胞種から成る多細胞システムで、各細胞間に種々の相互作用が作用することにより臓器の構造や機能が決定されている。様々のサイトカインや増殖因子、接着因子や細胞間基質がこれらの相互作用を媒介すると考えられているが、その詳細は明かでない。そこでわれわれはコラーゲンゲルを応用した3次元培養システムを開発し、様々の消化管粘膜上皮細胞と線維芽細胞の間に存在する相互作用について検討を行った。その結果、線維芽細胞(NIH3T3、Sweiss3T3、MRC-5、NRK)は一般に上皮細胞の増殖や生存を促進する活性を分泌した。一方、上皮細胞には線維芽細胞の生存や形態変化を促進する活性(FDF活性)を分泌するものとしないものが存在した。後者の性質を持つ上皮細胞(MKN-28、45、DLD-1、HepG2)にはトランスフォームしたものが多く、細胞が癌化するにつれFDF活性を失い、組織の構築能を喪失していく過程が推測された。
2)線維芽細胞増殖分化促進因子(FDF)の精製 胃粘膜上皮由来のRGM-1細胞によって産生されるFDF活性には肝臓の伊東細胞や生存や細胞突起の形成を促進し、神経細胞(PC-12)の神経突起の伸張を促すなど、多彩な生物学的作用が存在した。われわれはこのFDF活性の精製を行うためRGM-1細胞の大量培養を行い、約30Lの無血清培養上清を得た。塩析操作にて濃縮した培養上清を出発材料にして各種カラムを装着したFPLCシステムを用いて精製を行った。最終精製物をSDSポリアクリルアミドで電気泳動し銀染色を行ったところ、数本のバンドが確認され、30kDaに位置する蛋白がFDF活性をもつことが判明した。そのN末端アミノ酸配列を分析した結果、既知の蛋白質と相同性が認められなかったので、現在これを鋳型にして作成したDNAプローブを用いて遺伝子クローニングを行っている。
|
