1995 年度実績報告書

核内転写因子発現遮断による動脈硬化症の遺伝子治療(アンチセンス核酸固定法による人工血管作製)

研究課題

研究課題/領域番号	07457174
研究種目	一般研究(B)
研究機関	鹿児島大学
研究代表者	北島勲鹿児島大学, 医学部, 助教授 (50214797)
研究分担者	米澤傑鹿児島大学, 医学部, 助教授 (10175002) 明石満鹿児島大学, 工学部, 教授 (20145460) 丸山征郎鹿児島大学, 医学部, 教授 (20082282)
キーワード	血管平滑筋細胞 / 血管内皮細胞 / 転写因子 / トロンビン / NF-_KB / アンチセンスオリゴ / 人工血管
研究概要	初年度は申請した実験計画予定の実験内容をほぼ予定どおり終えることができた。 1)血管内皮細胞(EC)と血管平滑筋(SMC)を培養し、変性LDL、リゾPC、トロンビンを加え刺激した。定法に従い核蛋白を抽出しゲルシフトアッセイにて核内転写因子NF-_KBの活性化を検討したところ、刺激30分と4時間後に二峰性の活性を示すことがわかった。NF-_KBp65に対する抗体を用いた免疫染色の結果、刺激30分の活性化はNF-_KBのcytoplasmから核内へ移行した結果であり、シクロヘキシミド前処置で4時間後の活性のみが抑制されたことより、この4時間後の活性はdenovoの蛋白産生によるものであることがわかった。 2)次に、NF-_KBp65mRNAのAUG codonを標的にしたアンチセンスオリゴを合成した。対照はセンス配列とした。オリゴDNAを前処置して、これら細胞にトロンビンを刺激しゲルシフトアッセイ、HIV-LTR CATアッセイを施工したところ、アンチセンス投与細胞のみ特異的にNF-_KB活性が、センスオリゴを投与された細胞と比較すると約80%もの抑制差が認められた。さらに、IL-6,GM-CSF,c-mycのmRNAの発現をRT-PCR法にて検討すると約50%の減少が認められた。6日間投与実験の結果、トロンビン刺激によるSMCの異常増殖はアンチセンスNF-_KBオリゴが特異的に有意に押さえられることが確認できた。現在、本アンチセンスNNF-_KBがECの血管新生をも抑制することを認めており検討中である。また、次年度はin vivo応用に向けて、LPSによるエンドトキシンショックモデルに応用することを計画している。さらに、当初の計画どおりアンチセンス核酸を固定化することによる人工血管作成を工学部明石教授との共同実験を継続する予定である。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] 北島勲: "アンチセンスオリゴ法の臨床応用" 炎症. 15. 359-369 (1995)
[文献書誌] Tezuka Y.,et al.: "Expression of thrombomodulin in esophageal squmous cell carcinoma and its relationship to lymph node metastasis." Cancer Res.55. 4196-4200 (1995)
[文献書誌] Kitajima I.,et al.: "Induction of apoptosis in murine clonal osteoblasts expressed by human T-cell leukemia virus type I tax by NF-_KB and TNF-α." J.Bone.Miner.Res.11. 200-210 (1996)
[文献書誌] Kitajima I.,et al.: "Growth disturbance in vertebiral bones of rapidly growing rats following 14 days of spaceflight." J.Appl.Physiol.(in press). (1996)
[文献書誌] Kitajima,I.,et al.: "Enhanced E-cadherin expression and increased calcium-dependent cell-cell adhesion in human T-cell leukemia virus type I tax expressing PC12 cells." J.Cell.Sci.(in press). (1996)
[文献書誌] Furuzono,T.,et al.: "Novel fuctional polymers.Poly (dimethysiloxAnc)-polyamide multiblock copolymer III.Synthesis and surface properties of Disiloxan Aronatic polyamide multibolck copolymer." J.Appl.Polymer Sci.(in press). (1996)
[文献書誌] 北島勲: "分子動脈硬化学、凝固と内皮活性化" メディカルレビュー社, 363(109-119) (1995)

1995 年度 実績報告書

核内転写因子発現遮断による動脈硬化症の遺伝子治療(アンチセンス核酸固定法による人工血管作製)

研究代表者

北島 勲 鹿児島大学, 医学部, 助教授 (50214797)

研究成果

[文献書誌] 北島勲: "アンチセンスオリゴ法の臨床応用" 炎症. 15. 359-369 (1995)

[文献書誌] Tezuka Y.,et al.: "Expression of thrombomodulin in esophageal squmous cell carcinoma and its relationship to lymph node metastasis." Cancer Res.55. 4196-4200 (1995)

[文献書誌] Kitajima I.,et al.: "Induction of apoptosis in murine clonal osteoblasts expressed by human T-cell leukemia virus type I tax by NF-_KB and TNF-α." J.Bone.Miner.Res.11. 200-210 (1996)

[文献書誌] Kitajima I.,et al.: "Growth disturbance in vertebiral bones of rapidly growing rats following 14 days of spaceflight." J.Appl.Physiol.(in press). (1996)

[文献書誌] Kitajima,I.,et al.: "Enhanced E-cadherin expression and increased calcium-dependent cell-cell adhesion in human T-cell leukemia virus type I tax expressing PC12 cells." J.Cell.Sci.(in press). (1996)

[文献書誌] Furuzono,T.,et al.: "Novel fuctional polymers.Poly (dimethysiloxAnc)-polyamide multiblock copolymer III.Synthesis and surface properties of Disiloxan Aronatic polyamide multibolck copolymer." J.Appl.Polymer Sci.(in press). (1996)

[文献書誌] 北島勲: "分子動脈硬化学、凝固と内皮活性化" メディカルレビュー社, 363(109-119) (1995)

1995 年度実績報告書

北島勲鹿児島大学, 医学部, 助教授 (50214797)