骨髄異形性症候群細胞の造血刺激因子レセプター発現の多色サイトメトリー解析と遺伝子

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07457230
• 研究種目: 一般研究(B)
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 大野 竜三 浜松医科大学, 医学部, 教授 (70093002)
• 研究分担者: 柳 光章 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 飛田 規 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 竹下 明裕 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 助手 (00242769) ; 大西 一功 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 講師 (80252170)
• キーワード: 骨髄異形成症候群 / MDS / エリスロポイエチンレセプター / CD34 / CD38 / Glycophorin-A

研究概要

造血器疾患では、サイトカインレセプターの発現量およびその後のシグナル伝達の異常が報告されている。しかし、培養細胞株やコロニー形成細胞とは異なり、臨床検体上のサイトカインレセプターの測定は発現量が微量であること、目的細胞の単離方法等の問題から十分な情報が得られていない。今回私達は、フローサイトメトリー方法を発展使用し、臨床検体上のphenotype別のエリスロポイエチンレセプターの発現量を解析し、併せて骨髄異形成症候群(MDS)におけるその量的異常に関して検討した。その方法として、細胞株および健常人、MDS患者の骨髄細胞をビオチン化エリスロポイエチンとインキュベーション後ストレプトアビジン標識RE670にて染色し、蛍光強度をFACSにて測定した。そして、蛍光強度とKolmogorov-Smirnov検定上のD値よりエリスロポイエチンレセプター発現量を解析した。また、蛍光標識CD34,CD38,Glycophorin-Aに対するモノクローナル抗体との同時染色によりPhenotype別のエリスロポイエチンレセプターの発現量を解析した。その結果、エリスロポイエチンレセプター発現細胞株にて本測定法の特異性を認め、健常人骨髄細胞のGlycophrin-A,CD34分画等でエリスロポイエチンレセプター発現量を同定できた。またMDSではいずれのphenotypeにおいてもエリスロポイエチンレセプター発現量の減少が認められた。本研究により、フローサイトメトリー法を用いて赤芽球系細胞上でエリスロポイエチンレセプターの発現を簡便、特異的、高感度、phenotype別に定量できた。MDSではエリスロポイエチンレセプター発現量の減少が認められ、治療戦略上考慮すべきであると思われた。

研究成果

• [文献書誌] Kanamaru,A., Ohno,R.et al.: "All-trans retinoic acid for the treatment of newly diagnosed acute promyelocytic leukemia." Blood. 85. 1202-1206 (1995)
• [文献書誌] Takeshita,A., Ohno,R.et al.: "New flow cytometric method for the detection of minimally expressed multidrug resistance P-glycoprotein on normal and acute leukemia cells usingbiotinylated MRK16 and streptavidin-RED670." Jpn. J. Cancer Res.86. 607-615 (1995)
• [文献書誌] Kiyoi,H., Ohno,R.et al.: "Comparable profiles of the immunoglobulin heavy chain complementarity determining region(CDR)-3 in CD5 ^+ and CD5 ^- human cord blood B lymphocytes." Immunology. 85. 236-240 (1995)
• [文献書誌] Ohnishi,K., Ohno,R.et al.: "A randomized trial comparing interferon-α with busulfan for newly diagnosedchronic myelogenous leukemia in chronic phase." Blood. 86. 906-916 (1995)
• [文献書誌] Fukutani,H., Ohno,R.et al.: "Isoforms of PML-retinoic acid receptor alpha gused transcripts affectneither clinical features of acute promyelocytic leukemia nor prognosis after treatment with all-trans retinoic acid." Leukemia. 9. 1478-1482 (1995)
• [文献書誌] Shinjo,K., Ohno,R.et al.: "Expression of granulocyte colony-stimulating factor receptor increases with differentiation in myeloid cells by a newly-devised puantitative flow-cytometric assay." Br. J. Haematol.91. 783-794 (1995)