骨髄異形性症候群細胞の造血刺激因子レセプター発現の多色サイトメトリー解析と遺伝子

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07457230
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 大野 竜三 浜松医科大学, 医学部, 教授 (70093002)
• 研究分担者: 柳 光章 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 飛田 規 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 竹下 明裕 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 助手 (00242769) ; 大西 一功 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 講師 (80252170)
• キーワード: 骨髄異形成症候群 / MDS / erythropoietin receptor / thrombopoietin receptor / CD34 / CD38 / Glycophorin A / Glycoprotein IIb / IIIa

研究概要

造血器患患では、サイトカインレセプターの発現量およびその後のシグナル伝達の異常が報告されている。しかし、培養細胞株やコロニー形成細胞とは異なり、臨床検体上のサイトカインレセプターの測定は発現量が微量であること、目的細胞の単離方法等の問題から充分な情報が得られていない。そこで我々は、赤芽球系,巨核球系細胞の主要な分化増殖因子であるエリスロポエチン(EPO)、トロンボポエチン(TPO)について、non-isotopic ligand binding assay法を用いて臨床検体上のレセプターの発現量をphenotype別に解析し、骨髄異形成症候群(MDS)における発現の量的異常を検討した。細胞株および健常人、MDS患者の骨髄細胞をビオチン化したEPOあるいはTPOとインキュベーション後ストレプトアビジン標識RED670にて染色し、蛍光強度をFACSにて測定し、蛍光強度とKolmogorov-Smirnov検定上のD値よりEPOレセプター(EPO-R)およびTPOレセプター(TPO-R)発現量を検討した。また、蛍光標識CD34,CD38,Glycophorin A,Glycoprotein IIb/IIIaに対するモノクローナル抗体との同時染色により、phenotype別のレセプターの発現量を解析した。その結果、細胞株にて本測定法の特異性を認め、健常人骨髄細胞のGlycophrin A,CD34分画等でEPO-R発現量を、Glycoprotein IIb/IIIa、CD34分画等でTPO-R発現量を同定できた。MDSにおいては、EPO-RおよびTPO-R発現量はいずれのphenotypeにおいても減少していた。本研究により、non-isotopic ligand binding assay法を用いて、赤芽球系細胞上のEPO-R発現および巨核球系細胞上のTPO-R発現を簡便、特異的、高感度、phenotype別に定量できた。MDSではEPO-RおよびTPO-R発現量の減少が認められることにより、これらのレセプター遺伝子導入による遺伝子治療の可能性が示唆されたため、その検討を開始した。

研究成果

• [文献書誌] Kanamaru,A.,Ohno,R.et al.: "All-trans retinoic acid for the treatment of newly diagnosed acute promyelocytic leukemia." Blood. 85. 1202-1206 (1995)
• [文献書誌] Ohnishi,K.,Ohno,R.et al.: "A randomized trial comparing interferon-α with busulfan for newly diagnosedchronic myelogenous leukemia in chronic phase." Blood. 86. 906-916 (1995)
• [文献書誌] Shinjo,K.,Ohno,R.et al.: "Expression of granulocyte colony-stimulating factor receptor increases with differentiation in myeloid cells by a newly-devised puantitative flow-cytometric assay." Br.J.Haematol.91. 783-794 (1995)
• [文献書誌] Kobayashi,T.,Ohno,R.et al.: "Randomized trials between behenoyl cytarabine and bytarabine in combination induction and consolidation therapy,and with or without ubenimex after maintenance/intensification therapy in adult acute myeloid luekemia." J.Clin.Oncol.14. 204-213 (1996)
• [文献書誌] Kubo,K.,Ohno,R.et al.: "Different T-cell receptor repertories between lesions and peripheral blood in acute graft-versus-host disease after allogeneic bone marrow transplantation." Blood. 87. 3019-3026 (1996)
• [文献書誌] Takeshita,A.,Ohno,R.et al.: "Successful treatment of relapse of acute promyelocytic leukemia with a new synthetic retinoid,Am80." Ann.Intern.Med.124. 893-896 (1996)
• [文献書誌] Shinjo,K.,Ohno,R.et al.: "Erythropoietin receptor expression on human bone marrow erythroid precursor cells by a newly-devised quantitative flow-cytometric assay." Br.J.Haematol.96. 551-558 (1997)
• [文献書誌] Shinjo,K.,Ohno,R.et al.: "Ganulocyte colony-stimulating factor receptro at various differentiation stages of normal and leukemic hematopoietic cells." Leukemia and Lymphoma. (in press).