| 研究概要 |
GenePlateがcDNAbackになるためには、情報が保存可能であることと、繰り返しその情報を使用できることが必要である。そこでプレートに固定されたcDNAについて、1)繰り返し2nd-cDNAの合成が可能であるか、2)6箇月の保存の後にも2nd-cDNAの合成が可能であるかを検討した。
培養細胞から抽出したmRNAをプレート上でcDNAに変換した後、これをテンプレートとして10回2nd-cDNAを合成したそれぞれに対し、PCRによりβ-actinを増幅した結果である。10回ともβ-actinのバンドが確認され、繰り返しの2nd-cDNA合成が可能であることが証明された。
人の大腸癌組織10症例から抽出したRNAをcDNAに変換し、2nd-cDNAのβ-actin,ODC,junを増幅したものと、そのプレート上で合成された1st-cDNAをマイナス20℃で6箇月間保存した後に再度2nd-cDNAを合成して同様の増幅を行ったものとを比較した。その結果、6箇月間の保存が可能であることが証明された。
これらから、GenePlateによるcDNAbankは、情報のStorageと引き出し、さらに情報の繰り返し利用が可能なシステムであり、今後の癌研究にとって有用であることが証明された。
作成した人癌のcDNAbankを用いて、転移関連因子を検索した。現在最も注目している遺伝子はマトリックス分解酵素であるマトリライシンの大腸癌における発現である。大腸癌患者のcDNAbankからマトリライシンの発現を観察したところ、マトリライシンは癌部でのみ発現が認められ、更に癌の進行に従い強く発現することが解明された。
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