リンパ球のアポトーシス誘導に基づいた移植免疫寛容の導入

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07457265
• 研究機関: 国立小児病院
• 研究代表者: 鈴木 盛一 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 部長 (00111386)
• 研究分担者: 田村 明彦 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 研究員 ; 四宮 貴久 国立小児病院, 小児医療研究センター・共同利用室, 室長 (30196414) ; 絵野沢 伸 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 室長 (40232962)
• キーワード: アポトーシス / FTY720 / FasL / 遺伝子導入 / 肝移植 / ラット

研究概要

我々はこれまでに、新規免疫抑制物質FTY720はリンパ球にアポトーシスを誘導することにより拒絶反応の予防効果を発現することを明らかにしてきた。この薬剤を用いることにより、ラットの心、肝、腎、小腸移植で生着延長効果を認めた。また、イヌ腎移植でも有効であり、さらにシクロスポリン(CsA)やタクロリムス(FK506)とも相乗的な効果のあることを認めた。本年度は最終年度であり、遺伝子導入とFTY720を用いたリンパ球特異的で強力なアポトーシス誘導を行い、安全で効果的な免疫寛容誘導の研究をすすめた。すなわち、Fasリガンド(L)遺伝子を組み込んだプラスミド(pFasL)をリポソーム膜に包埋し、その外側に不活性化した細胞隔合能を持つセンダイウイルス(HVJ)を結合させベクター(HVJリポソーム)として用いた。pFasL-HVJリポソームをドナーラットの門脈から肝臓に注入し、3日後に同種レシピエントに肝移植を行った。その結果、対照に比較して著明な生着延長が得られ、最高で42日間の生存が認められた。浸潤した活性化Tリンパ球に対してアポトーシスが誘導されていることがR73とTUNEL法による二重染色で明らかにされている。この方法だと、肝に於けるFasL蛋白質の発現率は10〜20%程度であり、また発現期間も1月位で、免疫寛容を誘導するには不十分である。そこで、攻撃してくるリンパ球を減少させることにより、FasL遺伝子発現の効果を高めてやる目的で、移植前2日間(前日と当日術前)だけFTY720を5mg/Kg投与したところ、さらに著明な生着延長効果が得られるとともに50%で100日以上の永久生存が可能となった。今後は更に高率に免疫寛容を誘導させるためにFasLの発現率の向上を目指しているが、FasLを多量に発現させると移植肝に対して激症肝炎を引き起こすことを認めている。それは発現したFasLがMatrix metaloproteinase(MMP)により遊離型となり、それが好中球を呼び寄せるためであることが明らかにされている。そこで、一つには、遺伝子導入とともにMMPインヒビターを用いること、あるいは遊離型とならない膜結合型のFasLcDNAを作成し、それを導入することなどを中心に研究を進めている。本研究の結論として、FTY720の移植前投与と移植臓器へのFasL遺伝子導入により、リンパ球特異的かつ強力にアポトーシスを誘導させることがてき、生体には副作用がなく安全に免疫寛容を成立させうることが明らかにされた。

研究成果

• [文献書誌] S.Suzuki,et al.: "The induction of lymphocyte apoptosis in MRL-lpr/lpr mice treated with FTY720." Clin Exp Immunol. 107. 103-111 (1997)
• [文献書誌] M.Mitsusada,et al.: "Prevention of graft rejection and graft-versus-host reaction by a novel immunosuppressant,FTY720,in rat small bowel transplanation." Transpl Int. 10. 343-349 (1997)
• [文献書誌] Shinomiya T,et al.: "An immunosuppressive agent FTY720 increases intracellular concentration of calcium ion and induces apoptosis in HL60." Immunology. 91. 594-600 (1997)
• [文献書誌] S.Suzuki,et al.: "An immunosuppressive regimen using FTY720 combined with cyclosporine in canine kidney transplanation." Transplant Int. (in press).
• [文献書誌] T.Okuyama,et al.: "Fas-mediated apoptosis is involved in the elimination of gene-transduced hepat ocytes with E1/E3-deleted adenoviral vectors." J Gastroent Hepat. (in press).
• [文献書誌] T.Okuyama,et al.: "Efficient Fas-ligand gene expression in rodent liver after intravenous injection of a recombinant adenovirus by the use of a Cre-mediated switching system." Gene Therapy. (in press).