1996 年度実績報告書

アンチジーン発現ベクターを用いた悪性グリオーマに対する遺伝子療法

研究課題

研究課題/領域番号	07457310
研究機関	金沢大学
研究代表者	山下純宏金沢大学, 医学部, 教授 (90026948)
研究分担者	山口和男金沢大学, 遺伝子実験施設, 施設長教授 (00019879)
キーワード	triple stranded DNA / anti-gene strategy / retrovirus vector / EGFR / glioma
研究概要	従来よりわれわれは、c-erbB遺伝子のプロモーター領域に作用するアンチジーン合成DNAを作成し分子間三重鎖DNAの形成を試み、転写抑制によるc-erbB遺伝子発現抑制効果を検討してきた。c-erbB遺伝子のプロモーター領域のSP-1結合部位とCAP部位を含む26bpの領域を標的とした場合に低濃度の合成DNAで遺伝子の発現抑制が示され、これらの効果を報告してきた。この方法においては代謝、毒性に関して顕著な問題はないとされているが、腫瘍性疾患に対してはどのようにして効率良く発現させるかについてさらに工夫が必要であった。ウイルスベクターにより発現されるアンチジーンRNAの転写阻害効果については従来報告がなく、その効果を検討するため、組み換えレトロウイルスベクターを構築しin vitroでの転写阻害について検討した。CMVプロモーターによりc-erbBアンチジーンを発現するウイルスベクターゲノムpLNCAを構築し、パッケージング細胞psi-CREを用いてアンチジーンレトロウイルスベクターLNCAを得た。一方、EGFRプロモーターにてルシフェラーゼ遺伝子を発現するベクターゲノムpLNELをマウス繊維芽細胞NIH3T3に導入し、この遺伝子組換え体細胞にウイルスベクターLNCAの反復感染を行い経時的にルシフェラーゼ酵素活性の測定を行った。LNCA感染後48時間で量依存性に酵素活性が減少し、MOI=10の条件下にて約50%のルシフェラーゼ発現阻害効果が認められた。レトロウイルスベクターにより発現されるアンチジーンRNAにより、オリゴヌクレオチドと同様に転写阻害効果が得られることが示唆された。転写阻害に必要な力価やウイルスの投与時期などの条件についてさらに検討中である。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Yamashita J・Okada T,他: "Occult intrasacral meningocele associated with spina bifida : A case report" Surg Neurol. 46. 147-149 (1996)
[文献書誌] Fueki T,Sugiura S,Yamaguchi K: "Open strands adjacent to iterons promote the binding of the replication initiation protein (Rep) of pSC101 to the unit sequence of the iterons in vitro" Biochemica et Biophysica Acta. 1305. 181-188 (1996)
[文献書誌] Yamashita J,Yamashima T,他: "Transient brain ischemia provokes Ca2_+,PIP2 and calpain responses prior to delayed neuronal death in monkeys" Eur J Neurosci. 8. 1932-1944 (1996)
[文献書誌] Yamashita J,Kohda Y,他: "Dynamic changes of cathepsins B and L expression in the monkey hippocampus after transient ischemia" Biochem Biophys Res Comm. 228. 616-622 (1996)
[文献書誌] Yamashita J,Kawamura T,他: "Whole-cell analysis of NGK2 (mKv3.1a) K_+ channels stably expressed in mouse fibroblast cells" Neuroscience Letters. 197. 164-168 (1996)
[文献書誌] Yamashita J,Sakuda K,他: "Expression of NF2 gene product merlin in arachnoid villi and meningiomas" Brain Tumor Pathol. 13. 145-148 (1996)
[文献書誌] 山下純宏、山嶋哲盛他: "髄膜腫最新内科学大系72:脳脊髄の腫瘍、外傷、奇形、脊髄異常II" 中山書店, 26-36 (1996)
[文献書誌] 山下純宏、山嶋哲盛他: "神経膠腫最新内科学大系72:脳脊髄の腫瘍、外傷、奇形、脊髄異常II" 中山書店, 13-25 (1996)

1996 年度 実績報告書

アンチジーン発現ベクターを用いた悪性グリオーマに対する遺伝子療法

研究代表者

山下 純宏 金沢大学, 医学部, 教授 (90026948)

研究成果

[文献書誌] Yamashita J・Okada T,他: "Occult intrasacral meningocele associated with spina bifida : A case report" Surg Neurol. 46. 147-149 (1996)

[文献書誌] Fueki T,Sugiura S,Yamaguchi K: "Open strands adjacent to iterons promote the binding of the replication initiation protein (Rep) of pSC101 to the unit sequence of the iterons in vitro" Biochemica et Biophysica Acta. 1305. 181-188 (1996)

[文献書誌] Yamashita J,Yamashima T,他: "Transient brain ischemia provokes Ca2_+,PIP2 and calpain responses prior to delayed neuronal death in monkeys" Eur J Neurosci. 8. 1932-1944 (1996)

[文献書誌] Yamashita J,Kohda Y,他: "Dynamic changes of cathepsins B and L expression in the monkey hippocampus after transient ischemia" Biochem Biophys Res Comm. 228. 616-622 (1996)

[文献書誌] Yamashita J,Kawamura T,他: "Whole-cell analysis of NGK2 (mKv3.1a) K_+ channels stably expressed in mouse fibroblast cells" Neuroscience Letters. 197. 164-168 (1996)

[文献書誌] Yamashita J,Sakuda K,他: "Expression of NF2 gene product merlin in arachnoid villi and meningiomas" Brain Tumor Pathol. 13. 145-148 (1996)

[文献書誌] 山下純宏、山嶋哲盛 他: "髄膜腫 最新内科学大系72:脳脊髄の腫瘍、外傷、奇形、脊髄異常II" 中山書店, 26-36 (1996)

[文献書誌] 山下純宏、山嶋哲盛 他: "神経膠腫 最新内科学大系72:脳脊髄の腫瘍、外傷、奇形、脊髄異常II" 中山書店, 13-25 (1996)

1996 年度実績報告書

山下純宏金沢大学, 医学部, 教授 (90026948)

[文献書誌] 山下純宏、山嶋哲盛他: "髄膜腫最新内科学大系72:脳脊髄の腫瘍、外傷、奇形、脊髄異常II" 中山書店, 26-36 (1996)

[文献書誌] 山下純宏、山嶋哲盛他: "神経膠腫最新内科学大系72:脳脊髄の腫瘍、外傷、奇形、脊髄異常II" 中山書店, 13-25 (1996)