| 研究課題/領域番号 |
07457366
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
泌尿器科学
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
折笠 精一 東北大学, 医学部, 教授 (60001004)
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| 研究分担者 |
舩渡 忠男 東北大学, 医学部・付属病院, 講師 (70165455)
星 宣次 東北大学, 医学部, 助教授 (80107200)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| キーワード | PSAmRNA / prostate cancer / staging / R^T-PCR |
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| 研究概要 |
RT-PCR法により血中のPSAmRNAの検出を試みてきたが、ELISA法を用いた高感度血中PSAmRNA検出系を開発した。
前立腺癌細胞LNCaP及び前立腺肥大症ないし前立腺癌患者の78例の凍結血清を更に1200G.にて遠沈したものを用いた。新たなPSA primerを設定し、riverse transcriptaseとploymerase反応を同時にできるrTth Polymeraseを用い、目的とするPCR産物はdinitrophenyl(DNP)-labelled primeによりRT-PCRにより増幅させた。PCR産物はアルカリ変性後microwellに固相されれているPSAに特異的なprobeにhlbridizeされる。PCR産物とこのprobeの複合体は酵素抗体法により発色され検出される。
これまでの検出法では、末梢血単核球10^6個に混入された場合、LNCaP細胞10^0個まで検出可能であったが、ELISA法では10^<-1>まで検出可能で、前立腺癌例のみならず7例の前立腺肥大症からもPSAmRNAが検出された。本法はFicollによる血中の有核細胞の分離の必要がない。Southern Blot法は12時間を要したがELISA法は1時間で十分であった。
血中PSAmRNAは正常男性、女性でも僅かながら検出されている。臨床的に意義のある血中PSAmRNAの測定値を決定する必要があるが、ELISA法は定量が可能なので、今後血中PSAmRNA値の定量化を進めたい。
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