| 研究概要 |
粗精製BMPを用い,可溶化I型コラーゲンを支持体としたペレットとした。実験動物は4週齡Wistar系ラットを用い,背部皮下にペレットを埋入し,埋入後1週から3週に亘り観察を行った。観察期間に従って複合体を含む皮下組織を摘出,4%パラホルムアルデヒドで固定,10%EDTAで脱灰,または非脱灰でパラフィン包埋し,厚さ約4μmのパラフィン切片を作製した。m-RNAの検出は,DIG RNA Labeling Kit (Boehringer Mannheim)を用いてステオポンチン(OPN),オステオネクチン(ONC),および骨特異的とされているオステオカルシン(OCN)の各cDNAから合成したsingle strand RNA probeを調製し,in situ hybridizationを行った。
埋入後1週では,OPNのシグナルは,類骨形成部位のplumpな形態を示す細胞に強く,ONCのシグナルは,紡錘形を示す線維芽細胞様細胞に強く認められた。OCNのシグナルは観察されず,免疫組織化学的な局在も認められなかった。2週においては,軟骨様組織が広範に認められ,標本最外周部では骨様組織の形成が認められた。OPN,ONCのシグナルは,軟骨,あるいは骨様組織形成部位の広範な細胞で認められた。さらにOCNのシグナルは,軟骨様組織形成部位の一部と最外周部の骨様組織形成部において,骨細胞,および骨芽細胞で認められた。3週では,軟骨様組織は大部分消失し,未熟な骨梁が標本のほぼ全体を占めた。この時期では,OPNのシグナル発現細胞は減少する傾向を示したが,骨梁周囲の骨芽細胞を主体として強いOCNのシグナルが観察され、同部位において免疫組織化学的な局在も観察された。
粗精製BMPによる異所性骨誘導における骨基質蛋白の遺伝子発現は,骨組織の形成に伴って認められたが,軟骨様組織におけるOCNの発現のような特徴的な様式を示した。以上の研究成果の一部は,第3回国際口腔インプラント会議(横浜,1994),第36回歯科基礎医学会総会(大阪,1994),第48回口腔科学会総会(大分,1995)において発表した。
|
