1996 年度実績報告書

顕微光学法による免疫応答機構の解析

研究課題

研究課題/領域番号	07457531
研究機関	名古屋市立大学
研究代表者	中西守名古屋市立大学, 薬学部, 教授 (90090472)
研究分担者	古野忠秀名古屋市立大学, 薬学部, 助手 (80254308)
キーワード	共焦点レーザ顕微鏡 / 好塩基球 / 原子間力顕微鏡 / 抗原刺激 / SH2 / CD63 / 脱顆粒 / 画像解析
研究概要	免疫学の急激な進展は免疫学を医学の単なる一分野の研究にとどめず、医学、薬学、生化学、生物物理学等を総合した学際的な研究に変貌させつつある。そこで、本研究では、免疫系における特異的認識、細胞間相互作用、情報伝達とその制御を顕微光学技術を駆使して、全く新たな視点から解明することを試みた。具体的には、多波長励起共焦点レーザ顕微鏡システムを開発し、ミリ秒レベルでの免疫応答の画像解析システムを確立した。また、免疫細胞の情報伝達を自由にコントロールするマイクロマニュピュレーション技術を確立し、共焦点レーザ顕微鏡による計測と同時に利用する手法を確立した。さらに、走査プローブ顕微鏡を免疫応答機構の解析に利用することを企て、原子間力顕微鏡によるアレルギー初期反応のナノ・メートルレベルでの可視化解析技術を開発した。一方、これら開発した技術を利用して、T細胞、B細胞、ならびに、好塩基球を中心に免疫応答機構の可視化解析を行った。そして、免疫細胞の抗原刺激に伴いカルシウムシグナルが細胞質内だけでなく核内にも伝達することを明らかにした。また、SH2(ser-homology-2)の非常に相同性の高いアミノ酸配列に対するモノクローン抗体を作製し、抗原刺激に伴う細胞内SH2ドメインの動態を可視化して解析した。その結果、抗原刺激に伴い、ser-familyのチロシンキナーゼが細胞膜ならびに顕粒膜に特異的に集合することを明らかにした。また、顕粒膜に存在する膜蛋白質CD63に対するモノクローン抗体を用いて、抗原刺激に伴う好塩基球の活性化の際に、顕粒膜と細胞膜が融合し、化学伝達物質が細胞外に放出される過程を可視化して解析した。同時に、原子間力顕微鏡によりナノメートル・レベルの脱顕粒の動態を解明した。これらの研究成果は今後の免疫応答の研究に甚大な寄与をするものと考えられた。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] K. Takeuchi: "Effect of zeta potential of cationic liposomes containing cationic cholesterol derivatives on gene transfection." FEBS Lett.397. 207-209 (1996)
[文献書誌] T. Furuno: "Surface expressin of CD63 antigen (AD1 antigen) in P815 cells by transfected IgE receptors." Biochem. Biophys. Res. Commun.219. 740-744 (1996)
[文献書誌] T. Okabe: "Confocal fluorescence microscopy for antibodies against a hightly conserved sequence in SH2 domains." Biochem. Biophys. Res. Commun.223. 245-249 (1996)
[文献書誌] C. Torigoe: "Quantitative and realtime correlation between receptor aggregation and intracellular calcium signal transduction" Immunol. Lett.49. 169-174 (1996)
[文献書誌] M. Sumida: "Accumulation of photoporphyrinogen IX induced by acifluorfen methyl." Verlag Zeit. Naturforshung. 174-178 (1996)
[文献書誌] N. Ohyama: "Crossbridge rigidity effects differently on mIgM and IgE receptor-mediated calcium signals." Bioimages. 4. 191-192 (1996)
[文献書誌] 中西守: "実験医学別冊" 羊土社, 202 (1996)
[文献書誌] 中西守: "新タンパク質応用工学" フジ・テクノシステム, 950 (1996)

1996 年度 実績報告書

顕微光学法による免疫応答機構の解析

研究代表者

中西 守 名古屋市立大学, 薬学部, 教授 (90090472)

研究成果

[文献書誌] K. Takeuchi: "Effect of zeta potential of cationic liposomes containing cationic cholesterol derivatives on gene transfection." FEBS Lett.397. 207-209 (1996)

[文献書誌] T. Furuno: "Surface expressin of CD63 antigen (AD1 antigen) in P815 cells by transfected IgE receptors." Biochem. Biophys. Res. Commun.219. 740-744 (1996)

[文献書誌] T. Okabe: "Confocal fluorescence microscopy for antibodies against a hightly conserved sequence in SH2 domains." Biochem. Biophys. Res. Commun.223. 245-249 (1996)

[文献書誌] C. Torigoe: "Quantitative and realtime correlation between receptor aggregation and intracellular calcium signal transduction" Immunol. Lett.49. 169-174 (1996)

[文献書誌] M. Sumida: "Accumulation of photoporphyrinogen IX induced by acifluorfen methyl." Verlag Zeit. Naturforshung. 174-178 (1996)

[文献書誌] N. Ohyama: "Crossbridge rigidity effects differently on mIgM and IgE receptor-mediated calcium signals." Bioimages. 4. 191-192 (1996)

[文献書誌] 中西 守: "実験医学別冊" 羊土社, 202 (1996)

[文献書誌] 中西 守: "新タンパク質応用工学" フジ・テクノシステム, 950 (1996)

1996 年度実績報告書

中西守名古屋市立大学, 薬学部, 教授 (90090472)

[文献書誌] 中西守: "実験医学別冊" 羊土社, 202 (1996)

[文献書誌] 中西守: "新タンパク質応用工学" フジ・テクノシステム, 950 (1996)