1995 年度実績報告書

胃酸分泌の制御に関する細胞生化学的研究

研究課題

研究課題/領域番号	07457540
研究種目	一般研究(B)
研究機関	大阪大学
研究代表者	前田正知大阪大学, 薬学部, 教授 (80190297)
研究分担者	寺田知行大阪大学, 薬学部, 助手 (50135737)
キーワード	胃酸分泌酵素 / 胃壁細胞 / 胃癌細胞 / 遺伝子発現 / 細胞内蛋白質輸送 / DNA結合蛋白質 / GATA因子
研究概要	胃酸分泌酵素(αとβ)サブユニットの生合成および細胞内局在性の分子機構を検討するため、サブユニットに対するcDNAを培養細胞に発現させる実験系が必要である。そこで、ブタのβサブユニットに対するcDNAを高発現可能な発現プラスミドpcDL-SRαに挿入し、Cos-1細胞に導入した。その結果、βサブユニットに相当するバンドをウエスタンブロッテイングにより検出することができた。この結果から、βサブユニットだけでも安定に細胞内に発現することができるという報告を確認することができた。αサブユニットについては、最終的な発現プラスミドを作成する前に二本のcDNAを連結する操作が必要であり、これを進めている。胃酸分泌酵素のサブユニット遺伝子が共通の転写制御を受けているのかを明らかにする目的で、αとβサブユニット遺伝子の推定調節領域(5′上流配列)をレポーター遺伝子(ルシフェラーゼ)に連結し、転写に重要な領域を同定した。代表者が発見したDNA結合蛋白質(GATA-GT1とGATA-GT2)が存在すると、レポーター遺伝子の発現量が増加するので、GATA-GT1とGATA-GT2が両サブユニット遺伝子の転写に関与していることが示唆された。また、RNAポリメラーゼが結合する部位のすぐ上流にあるGATA蛋白質の結合部位が転写活性化に必須であることが明らかになった。ヒト胃ガン細胞MKN-45細胞はH2受容体を発現しており壁細胞様形態も示すことから、この細胞に着目してcDNAライブラリーを構築してスクリーニングし、ヒトGATA-GT1のクローンを得ることができた。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Maeda,M.and et al.: "The rat intrinsic factor gene : its 5′-upstream region and chief cell-specific transcription." Journal of Biochemistry. 117. 1305-1311 (1995)
[文献書誌] Nishi,T.and et al.: "Iden tification of the promoter region of human histamine H2 receptor gene." Biochemcal and Biophysical Research Communication. 210. 616-623 (1995)
[文献書誌] Omote,H.and et al.: "β Subunit Glu-185 of Escherichia coli H^+-ATPase (ATP synthase) is an essential residue" Journal of Biological Chemistry. 270. 25656-25660 (1995)
[文献書誌] Jeanteur,C.and et al.: "β-γ Subunit interaction is required for catalys is by H^+-ATPase (ATP synthase)." Journal of Biological Chemistry. 270. 22850-22854 (1995)
[文献書誌] Ueno,S.and et al.: "Functional consequence of substitution of the disulfide-bonded segment,Cys127-Cys150,located in the extracellular domain of the Na,K-ATPase β subunit : Arg148 is essenyial for the functional expression of Na,K-ATPase." Journal of Biochemistry. 117. 591-596 (1995)
[文献書誌] Maeda,M.and et al.: "Roles of gastric GATA DNA-binding proteins." Journal of Experimental Biology. 199(in press). (1996)

1995 年度 実績報告書

胃酸分泌の制御に関する細胞生化学的研究

研究代表者

前田 正知 大阪大学, 薬学部, 教授 (80190297)

研究成果

[文献書誌] Maeda,M.and et al.: "The rat intrinsic factor gene : its 5′-upstream region and chief cell-specific transcription." Journal of Biochemistry. 117. 1305-1311 (1995)

[文献書誌] Nishi,T.and et al.: "Iden tification of the promoter region of human histamine H2 receptor gene." Biochemcal and Biophysical Research Communication. 210. 616-623 (1995)

[文献書誌] Omote,H.and et al.: "β Subunit Glu-185 of Escherichia coli H^+-ATPase (ATP synthase) is an essential residue" Journal of Biological Chemistry. 270. 25656-25660 (1995)

[文献書誌] Jeanteur,C.and et al.: "β-γ Subunit interaction is required for catalys is by H^+-ATPase (ATP synthase)." Journal of Biological Chemistry. 270. 22850-22854 (1995)

[文献書誌] Ueno,S.and et al.: "Functional consequence of substitution of the disulfide-bonded segment,Cys127-Cys150,located in the extracellular domain of the Na,K-ATPase β subunit : Arg148 is essenyial for the functional expression of Na,K-ATPase." Journal of Biochemistry. 117. 591-596 (1995)

[文献書誌] Maeda,M.and et al.: "Roles of gastric GATA DNA-binding proteins." Journal of Experimental Biology. 199(in press). (1996)

1995 年度実績報告書

前田正知大阪大学, 薬学部, 教授 (80190297)