1996 年度実績報告書

スフェロイドを用いた人工肝補助装置の肝不全ブタでの肝機能補助効果に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号	07457595
研究種目	基盤研究(B)
研究機関	岡山大学
研究代表者	小出典男岡山大学, 医学部附属病院, 講師 (20142333)
研究分担者	田中紀章岡山大学, 医学部, 教授 (10127566)
キーワード	肝細胞スフェロイド / 人工肝臓 / アルブミン産生 / アンモニア処理能 / 急性肝不全 / 尿素合成 / 循環培養
研究概要	1)一頭のブタ(体重20-25kg)より短時間で100g程度の単離肝細胞を採取する技術の開発全身麻酔下でin situ perfusionとin vitro perfusionに金属ふるいによる分別濾過法を組み合わせて、単離細胞の採取を行った。分別濾過は37°C温浴槽中で4.7-8.6-30-50メッシュの金属ふるいに細胞浮遊液を通すことにより行った。30メッシュふるいに多くの凝集塊が残ることから、これに0.05%コラ-ゲナーゼ処理を追加することにより単離細胞の回収率を改善した。この結果、灌流開始から約2-3時間で90%以上が単離状態の肝細胞を約100g回収することが可能となった。(中村正基、他:人工臓器、1996) 2)ブタ肝細胞をbioreactorとする人工肝補助装置の作成と性能評価上記で得られる単離肝細胞を、(1)microcarrier担体に接着させる(2)スフェロイド培養でスフェロイド化したのちにアガロースで被包化するの2包でバイオリアクターとしたのちに、人工肝補助装置(Shiraha H,et al.: Biotech & Bioeng,1996)のhollow fiber型カートリッジに投入して装置を作成した。上記2タイプのhollow fiberカートリッジを温度、溶存酸素などが管理されている閉鎖循環回路に接続し、細胞の生存状態、一般肝機能、蛋白合成能を比較した。一部はpotacaval shunt術を施行して肝不全に陥ったブタに接続して肝機能補助効果を検討した。48時間までの循環培養では単位細胞あたりの機能評価では両者に遜色はなかったが、(1)ではmicrocarrierへの細胞接着効率が10%程度であり、(2)の生存率30%より劣ることが判明した。(2)を肝不全ブタに接続した成績では救命率の改善には至らなかったが、アンモニア上昇抑制効果が得られた。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Sasaki S,Koide N,et al.: "Immunohistochemica study of proteoglycans in O-galactosamine-induced acute hepatitis in rats." J Gastroenterol. 31(1). 46-54 (1996)
[文献書誌] Yada T,Koide N,et al.: "Transferent accumulation of perisimusoidal chondroitin sulfate proteoglycans during liver development and regeneration." J Histochem Cytochem. 44(9). 969-980 (1996)
[文献書誌] Morita T,Hada H,et al.: "Detection of hepattitis C virus RNA in circulating immune complexes by RT-PCR." Hepaato-Gatroenterol. 43(3). 582-585 (1996)
[文献書誌] Muramatsu H,Xiao-jun S,et al.: "Enzyme-linked Immunoassay of Midkine and Its Application in Evaluation of Midkine Levels in the Developing Mouse Brain and in Sera from Pateints with Hepatocellular Carcinoma." J Biochem. 119(6). 1171-1175 (1996)
[文献書誌] Niwa T,Sakatani T,et al.: "Cytochrome p450s of isolated rat hepatocytes in spheroid and monolayer cultures." Res Commun Molecular Pathology and Pharmacology. 91(3). 372-377 (1996)
[文献書誌] Shiraha H,Koide N,et al.: "Improve ment of serum amino acid profile in hepatic failure with the bio-artificial liver using multicellular hepatocyte spheroids." Biotechnology & Bioengineering. 50(4). 416-421 (1996)
[文献書誌] 小出典男、白羽英則、他: "人工臓器への応用、細胞外マトリックス-臨床医学への応用- 編集渡辺明治、岡崎薫" メデイカルレビュー社, 519 (1996)

1996 年度 実績報告書

スフェロイドを用いた人工肝補助装置の肝不全ブタでの肝機能補助効果に関する研究

研究代表者

小出 典男 岡山大学, 医学部附属病院, 講師 (20142333)

研究成果

[文献書誌] Sasaki S,Koide N,et al.: "Immunohistochemica study of proteoglycans in O-galactosamine-induced acute hepatitis in rats." J Gastroenterol. 31(1). 46-54 (1996)

[文献書誌] Yada T,Koide N,et al.: "Transferent accumulation of perisimusoidal chondroitin sulfate proteoglycans during liver development and regeneration." J Histochem Cytochem. 44(9). 969-980 (1996)

[文献書誌] Morita T,Hada H,et al.: "Detection of hepattitis C virus RNA in circulating immune complexes by RT-PCR." Hepaato-Gatroenterol. 43(3). 582-585 (1996)

[文献書誌] Muramatsu H,Xiao-jun S,et al.: "Enzyme-linked Immunoassay of Midkine and Its Application in Evaluation of Midkine Levels in the Developing Mouse Brain and in Sera from Pateints with Hepatocellular Carcinoma." J Biochem. 119(6). 1171-1175 (1996)

[文献書誌] Niwa T,Sakatani T,et al.: "Cytochrome p450s of isolated rat hepatocytes in spheroid and monolayer cultures." Res Commun Molecular Pathology and Pharmacology. 91(3). 372-377 (1996)

[文献書誌] Shiraha H,Koide N,et al.: "Improve ment of serum amino acid profile in hepatic failure with the bio-artificial liver using multicellular hepatocyte spheroids." Biotechnology & Bioengineering. 50(4). 416-421 (1996)

[文献書誌] 小出典男、白羽英則、他: "人工臓器への応用、細胞外マトリックス-臨床医学への応用- 編集渡辺明治、岡崎 薫" メデイカルレビュー社, 519 (1996)

1996 年度実績報告書

小出典男岡山大学, 医学部附属病院, 講師 (20142333)

[文献書誌] 小出典男、白羽英則、他: "人工臓器への応用、細胞外マトリックス-臨床医学への応用- 編集渡辺明治、岡崎薫" メデイカルレビュー社, 519 (1996)