| 研究課題/領域番号 |
07458203
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
白尾 智明 群馬大学, 医学部, 教授 (20171043)
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| 研究分担者 |
栗原 久 群馬大学, 医学部, 助手 (20008387)
田中 聡一 群馬大学, 医学部, 助手 (20272247)
林 謙介 群馬大学, 医学部, 助手 (50218567)
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| キーワード | ドレブリン / スパイル / アクチン / 神経細胞 / 樹状突起 |
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| 研究概要 |
(1)ドレブリンと他のアクチン関連蛋白との関係を生化学的に解析するために、ドレブリン、ミオシン、アクチン、トロポミオシン、α-アクチニン、カルデスモン、ゲルゾリン等を精製した。次にドレブリンと他の精製蛋白を種々組み合わせてアクチンフィラメントとの共沈実験を行い、ドレブリンはトロポミオシン、α-アクチニンと競合的にアクチンフィラメントに結合することを見いだした。ドレブリンの解離定数は1.2x10^<-6>であった。またmotility asayによりドレブリンを加えるとアクチンフィラメントの動きがわかり、このことによりドレブリンがミオシンフィラメントとアクチンフィラメントの関係を調節していることが示唆された。また上記蛋白に対する特異抗体を用いて、ドレブリン遺伝子導入線維芽細胞の免疫染色を行い、突起形成を起こすアクチンフィラメントからはトロポミオシンが失われていることが解った。
(2)ドレブリン特異的抗体を用いた免疫沈降法により、アクチン以外のドレブリン結合蛋白についての生化学的解析を行うと共に、ドレブリン結合蛋白に対するモノクローナル抗体を免疫沈降物を免疫原として試みた。数種のハイブリドーマが確立されたが、現在その抗原の解析中である。
(3)ES細胞からドレブリン遺伝子をクローニングしその配列を明らかにした。この遺伝子を八木らにより新たに開発されたgene targeting用のプラスミドに組み込み、これを用いてドレブリンA欠失マウスを作製する実験を現在行っている。
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