1995 年度実績報告書

MAP1bの細胞外リン酸化とシナプス形成における役割

研究課題

研究課題/領域番号	07458209
研究種目	一般研究(B)
研究機関	(財)東京都神経科学総合研究所
研究代表者	黒田洋一郎 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経生化学研究部門, 参事研究員 (30073084)
研究分担者	小林和夫 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経生化学研究部門, 研究員 (80100139) 谷口寿章藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助教授 (10257636)
キーワード	シナプス形成 / 記憶 / 蛋白質リン酸化 / エクト・プロデインキナーゼ / プロテオグリカン / マススペクトル / 細胞外ドメイン / シナプス可塑性
研究概要	大脳皮質ニューロンの初代培養系におけるシナプス形成において、MAP1bのリン酸化が必須であることから、この過程に関与しているプロテインキナーゼを固定する目的で、初代培養細胞のホモジェネートをSDSゲル電気泳動後、MAP1bのバンドを切り出し、バンドを直接SDS存在下、プロテアーゼ処理した。得られたペプチド混合物をDEAEプレカラムを結合した逆相HPLで分離し、ピークをそれぞれエレクトロスプレー質量分析計により分析し、cDNAのシークエンスから推定される一次構造と比較することで、ペプチドの同定を行なった。リン酸化に伴う質量変化(80Da)より、6つのペプチドがリン酸化されていることが見いだされた。これらのペプチドのリン酸化部位をエドマン分解、タンデムマス(MS/MS)法により固定したところ、プロリンの直前にあるセリンあるいはスレオニンがリン酸化されている場合が殆どで、MAP1bは、MAPキナーゼなどのいわゆるプロリン指向性キナーゼの基室であることが明らかとなった。この結果は、これらキナーゼによるMAP1bのリン酸化が神経突起伸展/シナプス形成に重要な役割を果たしていたことを示唆する。またMAP1bの細胞外ドメインの部分ペプチド抗体を作成し、部分ペプチドの抗原性細胞表面で免疫組織学的に認識できるかを調べた。それらの分布を電子顕微鏡で観察し、MAP1bがシナプス機能蛋白であることが免疫組織学的にも更に示唆され、シナプス部に局在することを見いだした。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Kuroda Y.: "Application of long-term cultured neurons in aging and neurological research: aluminum neurotoxicity, synaptic degeneration and Alzheimer's deaease" Gerontology. 41. 2-6 (1995)
[文献書誌] Fujii, S.: "The mechanism of ATP-induced long-term potentiation involves extracellular phosphorylation of memebrane proteins in guinea-pig hippocampal CA1 neurns." Neuroscience Letters. 187. 130-132 (1995)
[文献書誌] Fujii, S.: "Extracelluar phosphorylation of membrane protein modifies theta burst-induced long-term potentiation in CA1 neurons of guinea-pig hippocampal slices." Neuroscience Letters. 187. 133-136 (1995)
[文献書誌] Yamazaki, Shin: "TTX-resistant Ca2+ oscillation in cultured hypothalamus: similarity to the mammalian circadian pacemaker" NeuroReport. 6. 1306-1308 (1995)
[文献書誌] Manenti, S.,: "Demyristoylation of MARCKS, a major substrate of protein kinase C." Biochem. Soc. Trans.23. 561-564 (1995)
[文献書誌] Hayashi, N.: "Structural studies of tRNAs by capillary high performance liquid chromatography/ electrospray mass spectrometry." Nucleic Acids Res. Symp.34. 153-154 (1995)
[文献書誌] 宮下保司・下条信輔編: "脳から心へ-高次機能の解明に挑む" 岩波書店, 376 (1995)

1995 年度 実績報告書

MAP1bの細胞外リン酸化とシナプス形成における役割

研究代表者

黒田 洋一郎 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経生化学研究部門, 参事研究員 (30073084)

研究成果

[文献書誌] Kuroda Y.: "Application of long-term cultured neurons in aging and neurological research: aluminum neurotoxicity, synaptic degeneration and Alzheimer's deaease" Gerontology. 41. 2-6 (1995)

[文献書誌] Fujii, S.: "The mechanism of ATP-induced long-term potentiation involves extracellular phosphorylation of memebrane proteins in guinea-pig hippocampal CA1 neurns." Neuroscience Letters. 187. 130-132 (1995)

[文献書誌] Fujii, S.: "Extracelluar phosphorylation of membrane protein modifies theta burst-induced long-term potentiation in CA1 neurons of guinea-pig hippocampal slices." Neuroscience Letters. 187. 133-136 (1995)

[文献書誌] Yamazaki, Shin: "TTX-resistant Ca2+ oscillation in cultured hypothalamus: similarity to the mammalian circadian pacemaker" NeuroReport. 6. 1306-1308 (1995)

[文献書誌] Manenti, S.,: "Demyristoylation of MARCKS, a major substrate of protein kinase C." Biochem. Soc. Trans.23. 561-564 (1995)

[文献書誌] Hayashi, N.: "Structural studies of tRNAs by capillary high performance liquid chromatography/ electrospray mass spectrometry." Nucleic Acids Res. Symp.34. 153-154 (1995)

[文献書誌] 宮下保司・下条信輔 編: "脳から心へ-高次機能の解明に挑む" 岩波書店, 376 (1995)

1995 年度実績報告書

黒田洋一郎 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経生化学研究部門, 参事研究員 (30073084)

[文献書誌] 宮下保司・下条信輔編: "脳から心へ-高次機能の解明に挑む" 岩波書店, 376 (1995)