| 研究課題/領域番号 |
07458209
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
神経化学・神経薬理学
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| 研究機関 | (財)東京都神経科学総合研究所 |
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研究代表者 |
黒田 洋一郎 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経生化学研究部門, 参事研究員 (30073084)
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| 研究分担者 |
小林 和夫 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経生化学研究部門, 研究員 (80100139)
谷口 寿章 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助教授 (10257636)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| キーワード | シナプス形成 / 記憶 / タンパク質リン酸化 / エクト・プロテインキナーゼ / プロテオグリカン / マススペクトル / 細胞外ドメイン / シナプス可塑性 |
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| 研究概要 |
大脳皮質ニューロンの初代培養系におけるシナプス形成において、MAP1bのリン酸化が必須であることから、この過程に関与しているプロテインキナーゼを同定する目的で、初代培養細胞のホモジェネートをSDSゲル電気泳動後、MAP1bのバンドを切り出し、バンドを直接SDS存在下、プロテアーゼ処理した。得られたペプチド混合物をDEAEプレカラムを結合した逆相HPLCで分離し、ピークをそれぞれエレクトロスプレー質量分析計により分析し、cDNAのシークエンスから推定される一次構造と比較することで、ペプチドの同定を行なった。リン酸化に伴う質量変化(80Da)より、6つのペプチドがリン酸化されていることが見いだされた。これらのペプチドのリン酸化部位をエドマン分解、タンデムマス(MS/MS)法により同定したところ、プロリンの直前にあるセリンあるいはスレオニンがリン酸化されている場合が殆どで、MAP1bは、MAPキナーゼなどのいわゆるプロリン指向性キナーゼの基質であることが明らかとなった。この結果は、これらキナーゼによるMAP1bのリン酸化が神経突起伸展/シナプス形成に重要な役割を果たしていたことを示唆する。またMAP1bの細胞外ドメインの部分ペプチド抗体を作成し、部分ペプチドの抗原性が細胞表面で免疫組織学的に確認できるかを調べた。それらの分布を電子顕微鏡で観察し、MAP1bがシナプス機能蛋白であることが免疫組織学的にも更に示唆され、シナプス部に局在することを見いだした。
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