マウスにおける有効なコンディショナル・ジーンターゲッティング法の開発

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07458216
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: (財)癌研究会
• 研究代表者: 野田 哲生 財団法人癌研究會, 癌研究所・細胞生物部, 部長 (10183550)
• 研究分担者: 芝 清隆 財団法人癌研究會, 癌研究所・細胞生物部, 主任研究員 (40196415)
• キーワード: ジーンターゲティング / LoxP配列 / Cre組換え酵素 / 組換えアデノウイルス / L7プロモーター / OMPプロモーター

研究概要

本研究は、従来のジーンターゲティング法にバクテリオファージP1のCre/LoxPシステムを応用し、任意に変異導入を誘導でき、且つ汎用性の高いコンディショナルジーンターゲッティング法を確立することを目的としている。そのために本年度は、全身多臓器に応用可能で、且つ高い発現を示す二つのCre遺伝子の導入法の開発を試みた。第一の方法はアデノウイルスベクターを用いるものである。マウスの体内の殆どの組織で、非常に高いレベルの遺伝子発現を誘導するCAGGS及びSRαプロモーターの顆粒にCre組換え酵素遺伝子を連結し、これを持つ組換えアデノウイルスを作成した。次いでこのウイルスによるCre遺伝子の発現を、LoxP配列に挟まれたレポーター遺伝子を持つ培養細胞を用いて解析したところ、感染後48時間後には全ての細胞でLoxP配列間の切り出しが観察された。そこで、これらのウイルスをAPC遺伝子内に1対のLoxP配列が挿入された変異マウスの大腸内に注入し、その経過を観察したところ、約4週間で大腸腺腫の発生が高頻度で観察された。この腺腫ではLoxP配列に挟まれたAPC遺伝子が欠失していることが確認され、この組み換えアデノウイルスを用いたin vivoでのCre遺伝子導入法が確立された。第二の方法は、体内の各組織で発現可能なプロモーターの下流にCre遺伝子を繋いだトランスジェニックマウスと標的遺伝子内にLoxP配列を挿入したマウスを交配し、コンディショナルジーンターゲッティング用マウスを作成し、変異導入を誘導する方法である。この手法に関して本年度は、L7プロモーター、OMPプロモーター等、計8種のプロモーターの下流にCre遺伝子を連結し、トランスジェニックマウスの樹立を試みた。現在、これらのマウスを解析中である。

研究成果

• [文献書誌] Matsumoto,M.,Noda,T.,et al.: "Ataxia and epileptic seizure in mice lacking type 1 inositol 1,4,5-trisphophate receptor." Nature. 379. 168-171 (1996)
• [文献書誌] Sakaguchi,S.Noda,T.,et al.: "Loss of cerebellar Purkinje cells in aged mice homozygous for a disrupted PrP gene." Nature. 380. 528-531 (1996)
• [文献書誌] Takeshima,H.,Noda,T.,et al.: "Generation and characterization of mutant mice lacking ryanodine receptor type 3." J.Biol.Chem.271. 19649-19652 (1996)
• [文献書誌] Nagata,A.,Noda,T.,et al.: "G protein-coupled cholecystokinin-B/gastrin receptors are responsible for physiological cell growth of the stomach mucosa in vivo." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 11825-11830 (1996)
• [文献書誌] Nishi,M.,Noda,T.,et al.: "Unrestrained nociceptive response and disregulation of hearing ability in mice lacking noniceptin/orphaninFQ receptor." EMBOJ.(in press). (1997)
• [文献書誌] Suzuki,H.,Noda,T.,et al.: "A role for macrophage scavenger receptors in atherosclerosis and susceptibility to infection." Nature. (in press). (1997)
• [文献書誌] Shiba,K.,Noda,T.,et al.: "Creation of libraries with long open reading frames by polymerization of a microgene." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. (in press). (1997)
• [文献書誌] Niki,M.,Noda,T.,et al.: "Hematopoiesis in the fetal liver is impaired by targeted mutagenesis of a gene encoding a non-DNA binding subunit of the transcripion factor,PEBP2/CBP." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. (in press). (1997)