マウスにおける有効なコンディショナル・ジーンターゲッティング法の開発

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07458216
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 野田 哲生 東北大学, 医学部, 教授 (10183550)
• キーワード: Cre遺伝子 / ジーンターゲティング / ケラチン14遺伝子 / PO蛋白遺伝子 / アデノウイルスベクター / コンディショナル・ノックアウト / L7遺伝子

研究概要

本研究は、バクテリオファージPlのCre/loxPシステムを従来のジーンターゲティング法に応用し、標的遺伝子に任意に変異を導入でき、且つ汎用性の高いコンディショナル・ターゲティング法を確立することを目的としている。そのために全身多臓器に応用可能で、且つ高い発現を示す二つのCre遺伝子の導入法を開発した。第一の方法はアデノウイルスベクターを用いる方法で、昨年度この方法により消化管において遺伝子変異が導入可能であることを示したが、本年度はさらに対象を広げ、肝臓膵臓胆管上皮において変異導入が可能であることを示した。第二の方法は、Cre遺伝子を持つトランスジェニックマウスを用いる方法であり、ウイルス感染による方法に比べて特異性が高い手法である。本年度我々はK14(ケラチン14、皮膚特異的)、L7(プルキンエ細胞特異的),OMP(嗅神経上皮特異的)プロモーターの下流にCre遺伝子を連結したトランスジェニックマウスを作製し、さらにPO蛋白(シュワン細胞特異的)、MBP(オリゴデンドロサイト特異的)プロモーターを用いたマウスを他の研究室より導入し、これらのマウスでのCre蛋白による、組織特異的な変異導入を解析した。その結果、K14,L7及びPO蛋白プロモーターに連結したCre遺伝子を持つトランスジェニックマウスのいくつかで標的遺伝子に対し極めて特異性の高い変異導入が確認された。又、新たな標的遺伝子としてβ-カテニンを選び、コンディショナル・ノックアウトマウスの樹立に成功した。

研究成果

• [文献書誌] N.Nishi, T.Noda et al.: "Unrestrained nociceptive response and disregulation of hearing ability in mice lacking noniceptin/orphanin FQ receptor." EMBO J.16. 1854-1864 (1997)
• [文献書誌] H.Suzuki, T.Noda et al.: "A role for macrophage scavenger receptors in atherosclerosis and susceptivility to infection." Nature. 386. 292-296 (1997)
• [文献書誌] K.Shiba, T.Noda et al.: "Creation of libraries with long open reading frames by polymerization of a microgene." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 3805-3810 (1997)
• [文献書誌] M.Niki, T.Noda et al.: "Hematopoiesis in the fetal liver is impaired by targeted mutagenesis of a gene encoding a non-DNA binding submit of the transcription factor,PEBP2/CBP." Proc.Natl.Acad.Sci USA. 94. 5697-5702 (1997)
• [文献書誌] A.Terunuma, T.Noda et al.: "A novel genetic system to isolate a domonant negative effecter on DNA-binding activity of Oct-2." Nucl.Acid.Res.,. 25. 1984-1990 (1997)
• [文献書誌] Y.wakabayashi, T.Noda et al.: "Genetic and physical delineation of the region of the mouse deafness mutation shaker-2." Biochem.Biophis.Res.Comm.232. 107-110 (1997)
• [文献書誌] Y.Takei, T.Noda et al.: "Delayed development of nervous system inmice homozygous for disrupted microtubuleassociated protein 1B (MAP1B) gene." J.Cell Biol. 137. 1615-1626 (1997)
• [文献書誌] K.Shiba, T.Noda et al.: "Human lysyl-tRNA synthetase accepts N73 variants and rescues E.coli double-defective mutant." J.Biol.Chem.272. 22809-22816 (1997)
• [文献書誌] H.Shibata, T.Noda et al.: "Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of Apc gene." Science. 278. 120-123 (1997)
• [文献書誌] J.Aruga, T.Noda et al.: "Mouse Zic1 is involved in cerebellar development." J.Neurosci.(in press). (1998)
• [文献書誌] J.Toshima, T.Noda et al.: "Structural organization and chromosomal localization of the mouse Tesk1 (testis-specific protein kinase 1) gene." Gene. (in press). (1998)
• [文献書誌] C.Ikebe, T.Noda et al.: "Mouse LIM-kinase 2 gene : cDNA cloning,genomic organization and tissue-specific expression of two alternatively initiated transcripts." Genomics. (in press). (1998)