| 研究課題/領域番号 |
07556092
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
応用微生物学・応用生物化学
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| 研究機関 | 鳥取大学 |
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研究代表者 |
和泉 好計 鳥取大学, 工学部, 教授 (40026555)
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| 研究分担者 |
古田 武 鳥取大学, 工学部, 教授 (10026164)
大城 隆 鳥取大学, 工学部, 助手 (00233106)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1997
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| キーワード | ハロゲン化酵素 / ブロモペルオキシダーゼ / クロロペルオキシダーゼ / 海藻 / Corallina pilulifera / bpo遺伝子 / Curvularia inaequalis / チオアニソール |
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| 研究概要 |
本研究の研究成果は次の6つにまとめられる.
1.海藻ピリヒバのブロモペルオキシダーゼ(BPO)の精製と精製タンパク質の内部断片ペプチドのアミノ酸配列決定 海藻ピリヒバのBPOの精製と精製タンパク質の内部断片ペプチド16個のアミノ酸配列を決定した。
2.海藻ピリヒバのRNAおよびDNAの抽出とプローブの作成 海藻ピリヒバのRNAおよびDNAの抽出に成功し、内部ペプチドアミノ酸配列をもとに合成したプライマーを用いてPCRによってピリヒバBPO遺伝子のプローブを得た。
3.海藻ピリヒバのmRNAの精製、ds cDNAの合成、λgt10ファージへのパッケージング、およびプラークハイブリダイゼーション、海藻ピリヒバのmRNAの精製、ds cDNAの合成、λgt10ファージへのパッケージング、および前述のPCR産物をプローブとしたプラークハイブリダイゼーションを行った結果陽性プラークが得られた。
4.陽性プラークからのcDNA抽出、BPO遺伝子塩基配列決定 陽性プラークからcDNAを抽出しBPO遺伝子bpoの塩基配列決定することに成功した。
5.海藻ピリヒバのBPOの遺伝子bpoの大腸菌での発現と発現BPOの同定 海藻ピリヒバのBPOの遺伝子bpoを発現ベクターpKK223に挿入し大腸菌での発現を確認した。発現したBPOがピリヒバBPOの推定N-末アミノ酸や活性発現に対するバナジウム依存性などの性質と一致した。
6.海藻BPO、カビ由来クロロペルオキシダーゼ(CPO)による光学活性な生理活性物質の合成 海藻BPO、カビ由来CPOによる光学活性な生理活性物質チオアニソールのスキホキシドの合成を初めて見いだした。すなわち本研究によって海藻由来のハロゲン化酵素の新しい立体選択的酸化反応を提示し、生理活性物質合成への応用の可能性を示すことができた。
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