| 研究課題/領域番号 |
07556116
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| 研究種目 |
試験研究(B)
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
大塚 治城 東京大学, 農学部, 教授 (80261957)
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| 研究分担者 |
小沼 操 北海道大学, 獣医学部, 教授 (70109510)
柴田 勲 全農家畜衛生研究所, 主任調査役
遠矢 幸伸 鹿児島大学, 農学部, 助教授 (30021702)
見上 彪 東京大学, 農学部, 教授 (20091506)
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| キーワード | BHV-1 / ペクターワクチン / チミジンキナーゼ / PRV糖タンパク / マウス / 中和抗体 / タイレリア / p32 |
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| 研究概要 |
平成7年度の研究においてPRVのチミジンキナーゼ遺伝子を選択マーカーとする容易で効率の良いBHV-1組み換え体作製法を確立し、BHV-1のゲノムにPRVのgB、gC、gD、gI遺伝子を組み込んだ組み換え体を作出した。これらの組み換えウイルスがPRVの遺伝子によってコードされる糖タンパクを発現していることは特異的なPRV抗体を用いた螢光抗体法およびWestern blot法により確認した。これらの組み換えウイルスをマウスに接種し、強毒のPRVで攻撃して防御効果を調べた。PRVgC、gD、gEおよびgIを発現するBHV-1/TF7-1で接種を受けた7匹のマウスは、20LD_<50>の強毒PRVによる攻撃から7匹全部保護され、100LD_<50>の攻撃からは7匹中6匹が保護された。PRVgB、gC、gDを単独で発現するBHV-1/組み換え体をマウスに接種した場合、それぞれ保護効果を示したが、BHV/TF7-1の効果には及ばなかった。組み換えBHV-1接種を受けたマウスの血清中にはPRVの糖タンパクに対する抗体が単独あるいは複数で生成していた。PRVgBを発現するBHV-1組み換えウイルスはPRVに対する高い中和抗体を誘導したが、防御効果はあまりなく、防御効果の高いBHV-1/TF7-1を接種したマウス血清の中和抗体価は比較的低かった。
小沼はウシの小型ピロプラズマ病の病原体であるTheileria scrgenti原虫のp32遺伝子のクローニングに成功したが、平成7年度の研究において、p32遺伝子を発現用プラスミドpME18SのSRαプロモーターの下流に組み込み、COS7細胞で発現させた。p32タンパクの発現はp32に対するモノクローン抗体を用いて確認した。p32遺伝子を発現するBHV-1組み換え体の作出が現在進行中である。
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