遺伝子導入によるロタウイルス高感受性細胞の樹立とその診断法への応用

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07556121
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 源 宣之 岐阜大学, 農学部, 教授 (10144007)
• 研究分担者: 杉山 誠 岐阜大学, 農学部, 助教授 (80196774)
• キーワード: ロタウイルス / シアル酸 / ムチン / 遺伝子クローニング / 抗レセプター抗体 / 遺伝子発現 / VP4 / ガングリオシド

研究概要

本研究ではロタウイルス特異的レセプターあるいはその関連遺伝子を単離し、それらの遺伝子を培養細胞に導入して、ロタウイルス高感受性細胞の樹立することを最終目標に、まず、ロタウイルスの11セグメント遺伝子の解析及び細胞表面に存在するトリロタウイルスに対するレセプターの性状を検討した。また、レセプター遺伝子の単離や発現を確認するために、ロタウイルスレセプターに対するモノクローナル抗体の作出を試みた。その結果、以下のことが明らかになった。
1、レセプターに対応するウイルス構造蛋白質を同定する一貫として、トリロタウイルス、PO-13株の全ゲノム遺伝子の塩基配列を決定した。また、クローニングした遺伝子を培養細胞に導入し、それらにコードされる蛋白質を発現させ、各機能解析を行ったところ、VP4が細胞レセプターに対応するものと思われた。(Arch.Virol.,1995 Virology,1995.Vet.Microbiol.,1996.Arch.Virol.,1996.Virus Genes 1997.Virus Res.,1997)
2.ロタウイルスに感受性のMA-104細胞の表面に存在するレセプターの性状を酵素及び各種ガングリオシドにより検討したところ、MA-104細胞上のロタウイルスレセプター分子にシアル酸の関与が強く示唆された。(Arch.Virol.,発表予定)
3、牛乳及び卵白ムチンがロタウイルスと結合し、その感染増殖を阻止することを明らかにした。また、両ムチンに対する抗血清中に細胞レセプターに結合すると考えられる抗体が含まれれていたことから両ムチンに対するモノクローナル抗体の作出を行った。しかし、これまでのところレセプターに対するモノクローナル抗体は確立されていない。(第126回日本獣医学会、発表予定)
今後、レセプターと結合するウイルス構造蛋白質のアミノ酸部位を特定し、その部位に対する合成ペプチドを用いてモノクローナル抗体を作出する予定でる。

研究成果

• [文献書誌] Ito,H.: "Sequence analysis of cDNA for the VP6 protein of group A avian rotavirus:a comparison with group A mammalian rotaviruses." Archives of Virology. 140. 605-612 (1995)
• [文献書誌] Rohwedder,A.: "Sequnce analysis of pigeon,turkey,and chicken rotavirus VP8 identifies rotavirus 993/83,isolated from calf feces,as a pigeon rotavirus." Virology. 210. 231-235 (1995)
• [文献書誌] Ito,H.: "Expression of the major inner capsid protein,VP6,of avian rotavirus in mammalian cells." Veterinary Microbiology. 49. 257-265 (1996)
• [文献書誌] Ito,H.: "Mapping of antigenic sites on the major capsid protein of avian rotavirus using Escherichia coli expression system." Archives of Virology. 141. 2129-2138 (1996)
• [文献書誌] Rohwedder,A.: "Bovine rotavirus 993/83 shows a third subtype of avian VP7 protein." Virus genes. 14(2). 147-151 (1997)
• [文献書誌] Ito,H.: "Sequence analysis of the VP6 gene in group A turkey and chicken rotaviruses." Virus Research. 47. 79-83 (1997)
• [文献書誌] 伊藤啓史: "トリロタウイルスPO-13株ゲノム遺伝子の全塩基配列の決定" 第45回日本ウイルス学会総会. (1997年9月発表).
• [文献書誌] Sugiyama,M.: "Characterization of the receptor on MA104 cells for avian rotaviruses" Archives of Virology. (発表予定).
• [文献書誌] 川村尚良、: "トリロタウイルスレセプターに対するモノクローナル抗体の作出" 第126回日本獣医学会. (1998年8月発表予定).
• [文献書誌] Song,X,G.: "Antiviral activities in bovine colostrum that prevent human rotavirus infection in vivo." Milchwissenschaft. (発表予定).
• [文献書誌] Kanamaru,Y.: "Potent inhibitory activity against human rotavirus infection of high-Mr glycoproteins in cow milk." Archives of Virology. (発表予定).
• [文献書誌] Kanamaru,Y.: "Inhibition of human rotavirus infection by aglycoprotein in cow milk." Archives of Virology. (発表予定).