| 研究概要 |
1.細胞への透過生の高い1.8Mエチレングリコール(EG)、1.3Mエチレングリコール モノエチルエーテル(EME)と1.6M 1.2プロパネダイオール(PROH)に様々な濃度でトレファロース(T)とポリビニールピロリドン(PVP)を添加して実験に供した。GV期の牛卵母細胞を1.8MEGっと5%PVPの混合液にトテファロースを添加した溶液で凍結融解後体外受精したとき77.7%がメタフェース、22.2%が変性細胞であったが、単為発生はみられなかった。体外受精率は1.8MMEG+0.05MTまたは0.1MT溶液で処置したものが1.8MEG+0.2MTまたはトレファロースを含まない溶液で処置したものよりも高かった。しかし、正常受精と多精子侵入は各凍結保護剤間に差異はみられなかった。またGV期卵母細胞保護剤として用いたEG、EMEとPROHでは、その後の発生に差がみられなかった。この場合0.05Mまたは0.1MTを添加したものの方が0.2MTまたはTを含まない溶液よりも胚分割率、胚盤胞胚発生率が高かった。凍結処置していないGV期の卵分割率ならびに胚盤胞胚発生率は凍結処置したものよりも有意に高かった(P,0.01)。1.8MEG+0.05MTに5%の割合でPVPを添加し凍結した例では10%と20%PVPを添加した例に比べて胚盤胞胚への発生率が有意に高かった。このようにして作出した胚を二重蛍光染色法により受精8日目の細胞数を分析したところコントロールと凍結融解別に差異がみられなかった。
2.牛卵母細胞のGV期とM-2期別に凍結保存し、融解後電子顕微鏡により観察したところ、M-2期卵がGV期のものに比べて傷害の少ないことが解った。
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