新たな育種改良法としての染色体ベクターの開発

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07556137
• 応募区分: 試験
• 研究機関: 国立予防衛生研究所
• 研究代表者: 前川 秀彰 国立予防衛生研究所, 放射能管理室, 室長 (60100096)
• 研究分担者: 橋本 義文 京都工芸繊維大学, 助手 (60211471) ; 伴野 豊 九州大学, 農学部, 助手 (50192711) ; 嶋田 透 東京大学, 理学部, 助教授 (20202111) ; 岩淵 喜久男 東京農工大学, 農学部, 助教授 (00203399) ; 藤原 晴彦 東京大学, 理学部, 助教授 (40183933)
• キーワード: 染色体 / RFLP / テロメア / RAPD / 培養細胞 / バキュロウイルス / 二価染色体 / 転移因子

研究概要

染色体ベクター開発のための方向性として以下の点について引き続き研究を進めた。
1、ベクターにはどのような配列が必要か? 2、導入方法としての候補は何か? 3、挿入箇所を特定する方法はあるか? 4、染色体の同定は可能か?
1については、昨年動原体関連配列の単離を進めたがCENP-Aの調製が遅れ抗体の作成が進んでいない。(前川、土田、岩淵)転移因子マリナ-が特定の培養細胞で増幅していることが明になり染色体での機能について興味が持たれた。(前川)さらに、末端特異的に挿入が起こると考えられているレトロトランスポゾンがいくつか同定された。(藤原、前川)これらのことは転移因子が染色体で重要な機能を果たしていることを示しており、染色体の必須要素(特に重要な機能を保持している末端構造)を特定するのに大いに貢献すると期待できる。2は、バキュロウイルスを利用することであり特に開発された温度感受性株が有効であると判断できた。(橋本)また、細胞同定法を利用して導入に適した細胞を判定した。(岩淵、三木谷)140kbの大きさを収容できるウイルスはベクターの導入担体として適している上に細胞との親和性があることが重要である。3は、同定可能な染色体標品としての卵母細胞の二価染色体が今までよりも簡便に調製できる方法が確立され、また、FISH法もこの染色体に対して可能となった事により挿入箇所を特定できることになった。(土田、伴野、佐原)4については、RAPDとRFLPの組み合わせにより優性でないマーカーを単離する事が可能となった。(嶋田)また、cDNAライブラリーより染色体連関群マーカーを見つけだすことが出来るようになった。(原)以上の結果から3と4を組み合わせることにより連関郡と染色体を一致させることが可能となり染色体同定を進めることが可能となった。

研究成果

• [文献書誌] 阿部広明: "カイコ濃核病ウイルス1型感受性系統保存へのDNA診断法の応用." 日本蚕糸学雑誌. 65(3). 196-200 (1996)
• [文献書誌] 大林富美: "限性形蚕・限性セ-ブルならびに限性黒色蚕W染色体に存在する同一のRAPD." 日本蚕糸学雑誌. 65(5). 395-398 (1996)
• [文献書誌] 阿部広明: "Nucleotide sequence of the random amplified polymorphic DNA (RAPD) on the W chromosome of the silkworm,Bombyx mori (Lepidoptera : Bombycidae)." Applied Entomology and Zoology. 31(4). 633-637 (1996)
• [文献書誌] 冨田隆史: "Chromosomal localization of amplified esterase genes in insecticide resistant Culex mosquitoes." Insect Biochemistry and Molecular Biology. 26(8-9). 853-857 (1996)
• [文献書誌] 橋本義文: "Physical mapping and identification of interspersed homologous sequences of Trichoplusia ni granulosis virus genome." J.Gen.Virol.77. 555-563 (1996)
• [文献書誌] 藤原晴彦: "Developmental profile of wing imaginal discs of flugellos (fl),a wingless mutant of the silkworm,Bombyx mori." Development,Gene and Evolution. (in press). (1997)
• [文献書誌] Takahashi,H.: "A new family of site-specific retrotransposons,SART1,is inserted into telomeric repeats of the silkworm,Bombyx mori." Nucl.Acids Res.(in press). (1997)
• [文献書誌] 宮崎さおり: "Selective occurrence of endogeneous double-stranded RNAs in insects." Insect Biochem.Molec.Biol.26(8-9). 955-961 (1996)
• [文献書誌] Wani,M.: "Endocrine alteration and precocious premetamorphic behaviors in the greater wax moth larvae,Galleria mellonella,parasitized by an endoparasitoid,Apanteles galleriae." Arch.Insect Biochem.Physiol.34. 257-273 (1997)
• [文献書誌] Yamamoto,Y.: "In vitro rearing of the larval endoparasitoid,Venturia canescens (Gravenhorst)(Hymenopter a : lchneumonidae) II.Larval development." Appl.Ent.Zool.32(1). 256-258 (1997)
• [文献書誌] 伴野豊: "Reassesment of mapping of the E homeotic gene complex of Bombyx mori by linkage analysis and in situ hybridization with an Antennapedia clone as a probe." J.Seric.Sci.J.(in press).
• [文献書誌] SAKAIDA K.: "Aberrant meiotic behavior of chromosomes due to reciprocal translocation in EDs mutant of the silkworm,Bombyx mori." Hereditas. 125(1). 25-29 (1996)
• [文献書誌] 伴野豊: "Chromosomal features at different meiotic stages during spermatogenesis in Bombyx mori" J.Silkworms.Sericologia. 36(1). 51-57 (1996)
• [文献書誌] SONG F.: "Dimorphism in chromosome number of Samia cynthia walkeri in China." Int.J.Wild Silkmoth & Silk. 2(1). 11-13 (1996)
• [文献書誌] Kawamura,N.: "The characteristics of first filial (F1) tetraploid silkworms from tetraploid parants." J.Seric.Sci.Jpn.65(3). 157-164 (1996)
• [文献書誌] 武田甲: "Impaired yolk protein uptake by oocytes of Bombyx mori." Insect Biochem.and Molec.Biol.26. 607-616 (1996)
• [文献書誌] 土田耕三: "Purification and properties of a lipid transfer particle from Bombyx mori.Comparison to the lipid transfer particle from Manduca sexta." Biochem.Biophys.Acta. (in press). (1996)
• [文献書誌] 前川秀彰: "昆虫ゲノム解析の現状、" 蚕糸昆虫研資料. 21. 23-34 (1996)
• [文献書誌] 嶋田透: "変態と休眠の遺伝子.ネオ生物学シリーズ-ゲノムから見た新しい生物像-第9巻:昆虫[超能力の秘密]第8章" 共立出版., 112-126 (1996)
• [文献書誌] 橋本義文: "「耐虫性植物」、昆虫学-基礎と応用-" 三橋淳他編、朝倉書店、(印刷中),