新しい抗炎症薬開発を目指した脂肪酸シクロオキシゲナーゼ-2の測定キットの開発

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557014
• 研究種目: 試験研究(B)
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 山本 尚三 徳島大学, 医学部, 教授 (50025607)
• 研究分担者: 樋口 昭平 大正製薬, 開発研究所, 室長 ; 鹿取 信 北里大学, 医学部, 教授 (50050365) ; 田辺 忠 国立循環器病センター, 研究所, 部長 (60025624)
• キーワード: シクロオキシゲナーゼ-2 / プロスタグランジン / トロンボキサン / 抗炎症薬 / 炎症 / ウエスタンブロット法 / ノーザンブロット法 / 酵素阻害剤

研究概要

抗炎症薬、抗血小板凝集薬、抗アレルギー薬のどの開発に関して、シクロオキシゲナーゼ(COX)という酵素が阻害されるかどうかということが、研究開発の1つの示標とされる。新しいアイソザイムのCOX-2の発見によって、検討すべきはCOX-2であるという認識の上に、従来型のCOX-1と識別しつつ、抗炎症薬の効果の1つとしてCOX-2の発現や活性に及ぼす影響を、的確に把握できるように、COX-2の活性・mRNA・蛋白量の測定方法を確立し、キット化して実用に供することを目的として、本年度は次の成果を得た。
1)抗体の調製(分担:山本)
COX-1とCOX-2にそれぞれ特異的な抗体のうち、後者は山本と田辺がすでに作っているが、以前に作ったウシ精嚢腺のCOXのモノクローン抗体のうちに、COX-1特異的なものを見出した。
2)COX mRNA量測定法(分担:田辺)
ヒトのCOX-1とCOX-2のcDNAをプロープに使って、COX-1 mRNAに妨害されることなく特異的にCOX-2 mRNAをブロッティングできる条件を定めた。
3)炎症モデル設定(分担:鹿取、樋口)
ラットのカラゲニン胸膜炎で、血漿浸出速度、PGE_2レベル、白血球でのCOX-2発現レベルの三者がほぼ平行して推移すること、さらに、選択的COX-2阻害薬NS398が、浸出液中PGE_2レベルを低下させることを明らかにした。また、エンドトキシン処理ラットで誘導されるCOX-2に対して、NS398がin vivoの阻害効果を示した。

研究成果

• [文献書誌] T.Endo: "Induction of cyclooxygenase-2 is responsible for interleukin-1 β-dependent prostaglandin E_2 synthesis by human lung fibroblasts" Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.12. 358-365 (1995)
• [文献書誌] K.Yamamoto: "Transcriptional roles of nuclear factor kB and nuclear factor-interleukin-6 in the tumor necrosis factor α-dependent induction of cyclooxygenase-2 in MC3T3-E1 cells" J.Biol.Chem.270. 31315-31320 (1995)
• [文献書誌] H.Inoue: "Transcriptional regulation of human prostaglandin-endoperoxide synthase-2 gene by lipopolysaccharide and phorbol ester in vascular endothelial cells" J.Biol.Chem.270. 24965-24971 (1995)
• [文献書誌] H.Niiro: "Inhibition by interleukin-10 of inducible cyclooxygenase expression in lipopolysaccharide-stimulated monocytes : its underlying mechanism in comparison with interleukin-4" Blood. 85. 3736-3745 (1995)
• [文献書誌] T.Shoda: "Induction of cyclooxygenase type-2 (COX-2) in rat endometrlum at the peak of serum estradiol during the esterus cycle" Jpn.J.Pharmacol.69. 289-291 (1995)
• [文献書誌] S.Takahashi: "Expression of prostaglandin H synthase-2 in endotoxic shock induced in rats" Arch.Int.Pharm.Ther.330. 102-115 (1995)
• [文献書誌] 山本尚三(編): "Molecular Biology of the Arachidonate Cascade" Elsevier Science B.V., 380 (1995)