四清マーカー陰性のB型ウイルス肝炎の診断キットの開発

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557023
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 内田 俊和 日本大学, 医学部, 助教授 (80060078)
• 研究分担者: 前田 俊郎 三菱化学(株), 診断システム, 副主任研究員 ; 荒川 泰行 日本大学, 医学部, 教授 (50059698) ; 杉谷 雅彦 日本大学, 医学部, 講師 (40187654)
• キーワード: B型肝炎 / B型ウイルス / X蛋白 / アンチX

研究概要

B型肝炎に急性感染すると血清HBsAgあるいは抗HBcIgM抗体が、慢性感染すると血清HBsAgが陽性になるとこれまで信じられてきたが、これらの血清マーカーが陽性にならないB型肝炎が存在することが明らかになった。これをサイレントB型肝炎と称するが、この起因ウイルス遺伝子は共通してX領域に8塩基の欠失を有している。この欠失のためX蛋白の機能が喪失し、しかもコア遺伝子のプロモーター活性が減少し、その結果ウイルスの複製と発現が抑制されるのであろう。このため血清ウイルスマーカーが既存の測定系で陽性にならないと考えられる。現時点でのサイレントB型ウイルスの同定は血清ウイルスDNAをPCR法で増幅すること、及び肝組織のHBs抗原を免疫染色法で染め出すことによっている。この研究で我々はサイレントB型ウイルス抗体の検出系を開発しようとした。8塩基の欠失によりフレームが変わり、X領域のアンチセンスに161アミノ酸からなる新たな読みとり枠ができることが解ったので、その蛋白とセンスのX蛋白に対する抗体の検出を試みた。そのために合成ペプチドをアンチX蛋白では4種類、センスX蛋白は2種類作製し、通常のELISA法で抗体の測定を行った。血清は急性と慢性サイレントB型肝炎を、コントロールとして健常人血清を用いた。その結果はアンチX蛋白とセンスX蛋白両者に対する抗体はサイレントB型肝炎では健常人より高い傾向を示した。しかし残念ながら、臨床導入が可能なほどのはっきりしたデーターは得られなかった。

研究成果

• [文献書誌] Uchida T: "Small hepatocellular carcinoma: its relationship to multistep hepatocarcinogenesis" Pathol.Int.45. 175-184 (1995)
• [文献書誌] Uchida T,Gotoh K,Shikata T: "Complete nucleotide sequences and the characteristic of two hepatitis B virus mutants causing serologically negative acute or chronic hepatitis B" J.Med.Virol.45. 247-252 (1995)
• [文献書誌] Gotoh K,Mima S,Uchida T,et al.: "Nucleotide sequence of hepatitis B virus isolated from subjects without anti-hepatitis B core antibody" J.Med.Virol.46. 201-206 (1995)
• [文献書誌] Kaneko M,Uchida T,Moriyama M,et al.: "Probable implication of mutations of the X open reading frame in the onset of fulminant hepatitis B" J. Med. Virol.47. 204-208 (1995)
• [文献書誌] Shrestha SM,Okuda K, Uchida T,et al.: "Endemicity and clinical picture of liver disease due to obstruction of the hepatic portion of the inferior vena cava in Nepal" J.Gastroenterol.Hepatol.11. 170-179 (1996)
• [文献書誌] Uchida T,Saitoh T,Shinzawa H: "Mutations of the X region of hepatitis B virus and their clinical implication" Pathol.Int.47. 183-193 (1997)
• [文献書誌] Uchida T,Kaneita Y,Gotoh K,et al.: "Hepatitis C is frequently coinfected with serum marker-megative hepatitis B virus." J.Med.Virol.52. 399-405 (1997)
• [文献書誌] Yamagoe S,Akasaka T,Uchida T,et al.: "Expression of a neutrophil chemotactic protein LECT2 in human hepatocytes revealed by immunohistochemical studies using polyclonal and monoclonal antibodies" Biochem.Biophys.Res.Commun.237. 116-120 (1997)