| 研究課題/領域番号 |
07557023
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
人体病理学
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
内田 俊和 日本大学, 医学部, 助教授 (80060078)
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| 研究分担者 |
前田 俊郎 三菱化学(株), 診断システム, 副主任研究員
荒川 泰行 日本大学, 医学部, 教授 (50059698)
杉谷 雅彦 日本大学, 医学部, 講師 (40187654)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1997
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| キーワード | B型肝炎 / ウイルス肝炎 / HBs抗原 / エンベロープ / X遺伝子 / X蛋白 |
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| 研究概要 |
急性及び慢性サイレントB型肝炎患者血清をサンプルとして、X蛋白とアンチX蛋白にたいする特異抗体の測定をELISA法により行った。アンチX蛋白はマイナスX鎖と相補的な読み枠からコードされる蛋白(161アミノ酸)である。この二つの蛋白の抗原決定基になりそうなアミノ酸配列の合成ペプチドを作製し、ELISA法の抗原とした。コントロールとして、合成ペプチドのポリクロナール抗体、健常人血清を準備した。その結果、急性・慢性サイレントB型肝炎患者血清は健常人血清に較べ合成ペプチドに対する抗体が高値を示す傾向があったが、この系はそのまま実用化できるとは考えられなかった。現時点ではこれまでも行ってきた血清中のHBVDNAを増幅するnested PCR法が最も高感度と結論された。また肝臓組織が入手できたならHBsAgの免疫染色を施すのが最も簡便で特異的はサイレントHBVの検出法である。
サイレントHBVDNAにはX領域に共通して変異がある。このX変異HBVDNAをタンデム二量体にして、プラズミドにクローニングし、肝癌細胞由来の培養樹立株にin vitroトランスフェクションした。コントロールとしてHBsAg陽性の野性株HBVDNAを用意した。各々トランスフェクション後培養上清に分泌されるHBsAgとHBeAgを定量したところ、サイレントHBVDNAは野性株HBVDNAに較べ両抗原共に1/3-1/5に減少し、やはり遺伝子発現が抑制されていることがin vitroの系でも証明された。
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