膵癌関連抗原と癌抑制遺伝子のimmuno-PCR法を用いた超高感度検出法の開発

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557046
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 今井 浩三 札幌医科大学, 医学部, 教授 (60117603)
• 研究分担者: 日野田 裕治 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (10165128)
• キーワード: Immuno-PCR / 膵癌 / MUSE11抗原

研究概要

基礎的検討として昨年に引き続きICAM-1のdouble determinant enzyme immunoassay (DDEIA)の測定系にImmuno-PCRを応用し、バックグラウンドシグナル低下の工夫を試みた。これまでの検討で、(1)鋳型DNAのストレプトアビジンとビオチン化二次抗体への非特異的結合、および(2)血清蛋白の影響が大きな因子であることが明らかにされたため、(1)に対してビオチン化二次抗体とアビジンcDNAをあらかじめ結合させカラムクロマトグラフィーにて結合体を精製してImmuno-PCRを行ったが、感度の改善は得られなかった。(2)については、最近脳脊髄液中のTNFをImmuno-PCR法で高感度に測定し得た報告が出されたため、PBSに溶解した純化ICAM-1の測定を行ったところ再現性と感度(10^1倍)の改善が得られた。さらに、髄液中の蛋白側定系としてmyelin basic protein のDDEIAにImmuno-PCR法の応用を試み、この系でもEIAに比較して10^2倍の感度が得られた。
膵癌関連抗原MUSE11(MUC1ムチン)のsandwich enzyme immunoassayにImmuno-PCR法を応用し、組み換え蛋白や細胞株培養上清ではimmuno-assayの10^2倍の感度が得られた。繰り返し測定による再現性にはまだ問題があるが、患者血清でもほぼ10^2倍の感度が得られ、Immunoassay陰性でも陽性を示す例が見出されつつある。

研究成果

• [文献書誌] Shijibo,N.,et al.: "Circulating soluble intercellula adhesion molecule-1 (sICAM-1) in patients with sarcoidosis." Clin.Exp.Immunol.106. 549-554 (1996)
• [文献書誌] 今井浩三 他: "Immuno-polymerase chain reaction (Immuno-PCR)を用いた微量抗原検出." 蛋白質核酸酵素. in press. (1996)
• [文献書誌] Itoh,F.,et al.: "Double determinant immuno-polymerase chain reaction for detecting sICAM-1." Artificial Organs. in press. (1996)
• [文献書誌] Arima,K.,et al: "Clinical significance of soluble ICAM-1 antigen in sera of patients with various liver diseases." Tumor Res.in press. (1996)
• [文献書誌] Makiguchi,Y.et al.: "Effect of MUC1 mucin,an anti-adhesion molecule,on tumor cell growth." Jpn.J.Cancer Res.87. 505-511 (1997)