定着因子融合タンパク質を用いた齲蝕の免疫学的予防法の開発

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557134
• 応募区分: 試験
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 古賀 敏比古 九州大学, 歯学部, 教授 (10037541)
• キーワード: 齲蝕 / Streptococcus mutans / 定着因子 / 融合タンパク質 / 受動免疫 / タンパク質抗原 / グルカン合成酵素 / 齲蝕予防

研究概要

齲蝕の最も主要な病原菌と考えられているStreptocococcus mutansが歯面へ定着するためには、同菌の歯体表層タンパク質抗原(PAc)による歯面上のペリクルヘの接着とスクロースを基質としてグルカン合成酵素(GTF-I)が合成する非水溶性グルカンを介した菌体の蓄積という二つの過程が必要であると考えられている。本研究では、両定着因子の機能領域からなる融合タンパク質を遺伝子工学的手法を用いて作製し、齲蝕の免疫学的予防への応用を目指す。昨年度は、S.mutans MT8148株のGTF-Iのグルカン結合領域(GB)とPAcのA領域(PAcA)の融合タンパク質(PAcA:GB)を遺伝子工学的手法により作製した。本年度は、さらにGTF-Iのスクロース結合領域(SB)とPAcAとの融合タンパク質(PAcA:SB)を作製した。さらに、GTF-SB、GTF-S、フルクタン合成酵素などをコードする遺伝子を失活させスクロースを基質とする酵素としてGTF-Iのみを産生するS.mutansの形質転換株を作製した。ついで、アフィニティークロマトグラフィー法やゲルろ過法などを用いてPAcA:GB、PAcA:SB、PAc、PAcA、GTF-I、GB及びSBをそれぞれ約20mg精製した。これらのタンパク質でウサギを免疫し、抗血清を調製した。今後、これらの抗血清によるS.mutansの歯面付着阻害作用について検討する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Senpuku,H.: "Identification of a repeated epitope recognized by human serum antibodies in a surface protein antigen of Streptococcus mutans" Oral Microbiol.Immunol.11. 121-128 (1996)
• [文献書誌] Yamashita,Y.: "Molecular and genetic analysis of multiple changes in the levels of production of virulence factors in subcultured variant of Streptococcus mutans" FEBS Microbiol.Lett.144. 81-87 (1996)
• [文献書誌] Senpuku,H.: "Identification of human antigenic epitopes in an alanine-rich repeating region using sera from hu-PBL-SCID mice immunized with a surface protein antigen of Streptococcus mutans" Oral Microbiiol.Lett.5. 343-349 (1996)
• [文献書誌] Murakami,Y.: "Identification of a frameshift mutation resulting in premature termination and loss of cell wall anchoring of the PAc antigen of Streptococcus mutans strain GS-5" Infect.Immun.65. 794-797 (1997)
• [文献書誌] 古賀 敏比古: "齲蝕免疫" 歯界展望. 88. 1035-1046 (1996)