好酸球顆粒蛋白質の細胞傷害活性の検証に関する研究

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557163
• 研究種目: 試験研究(B)
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 大内 和雄 東北大学, 薬学部, 教授 (20006357)
• 研究分担者: 渡邉 雅子 東北大学, 薬学部, 講師 (90182948)
• キーワード: ラット好酸球 / major basic protein / ラットMBP / ラットMBP cDNA

研究概要

今年度は研究代表者らが確立したラットの好酸球増多症モデルを活用してラットmajor basic protein(MBP)の精製行い、部分アミノ酸配列を明らかにした。さらに、得られた情報をもとに、MBPのcDNAクローニングを以下に述べる方法で行った。好酸球増多症を誘発させたラットの骨髄から骨髄細胞を採取し、AGPC法によりtotal RNAを調製し、RT-PCR法によってMBPのcDNAの部分塩基配列を決定した。その結果、約240bpのPCR産物が得られ、その塩基配列にはヒトおよびモルモットのMBPの対応する部分と高い相同性が認められた。これらの塩基配列をもとにプライマーを作製し、3′および5′RACE法によりラットMBP cDNAの全長の塩基配列を決定した。ラットMBPのcDNAは全長が867bpで5′noncoding regionが45bp、coding regionが684bp(signal peptide、proprotein、matureMBPの合計領域)、3′coding regionが125bp(poly A tailを含む)であった。ラットMBPは、ヒトMBPと65%の相同性があり、モルモットMBP(GMBP1)とは61%の相同性があることが明らかになった。ラットMBPのcDNAの解析の結果、ラットMBPもヒトおよびモルモットのMBPと同様にproprotein構造をもつことが示された。Proprotein部分はグルタミン酸が豊富であり、pI値は3.5と計算された。一方、ラットMBPのN末端側のmature protein部分は、分子量13.5kD、pI11.9であることが明らかになった。したがって、ラットMBPにおいてもproproteinがmature proteinの細胞傷害性を抑制していることが示された。現在、RT-PCR法によりラットMBPの全長のcDNAをもつプラスミドを作製し、recombinantMBPを作製するための準備を行っている。

研究成果

• [文献書誌] Kazuo Ohuchi et al.: "Isolation and partial characterization of eosinophil granule protein in rats-Eosinophil cationic protein and major basic protein" Int. Arch. Allergy Immunol.108. 11-18 (1995)
• [文献書誌] Kazuo Ohuchi et al.: "Cloning of cDNA for rat eosinophil major basic protein" Biohim. Biophys. Acta. 1264. 261-264 (1995)
• [文献書誌] Kazuo Ohuchi et al.: "Characterization of leukocyte-derived neutrophil chemotactic factor-2 and its possible roles in neutrophil infiltration in allergic inflammation in rats" Int. Arch. Allergy Immunol.108. 148-157 (1995)
• [文献書誌] Kazuo Ohuchi et al.: "Leukocyte-derived neutrophil chemotactic factor-2 produced by infiltrated leukocytes in allergic inflammation model in rats is macrophage inflamatory protein-2" Immunol. Invest.24. 757-764 (1995)
• [文献書誌] Kazuo Ohuchi et al.: "Dexamethasone inhibits production of macrophage inflammatory protein 2 in the leukoytes in rat allergic inflammation" Eur. J. Pharmacol.284. 257-263 (1995)
• [文献書誌] Masako Watanabe et al.: "Enhancement by cyclo-oxygenase inhibitors of platelet-activating factor producion in thapsigargin-stimulated macrophages" Br. J. Pharmacol.116. 2141-2147 (1995)
• [文献書誌] Masako Watanabe et al.: "Suppression of interleukin-lalpha production by proein kinase C activators in human vascular endothelial cells" J. Pharmacol. Exp. Ther.272. 808-814 (1995)
• [文献書誌] Kazuo Ohuchi et al.: "Platelet-activating factor production in stimulated macrophages is down-regulated by cocurrently produced prostaglandin E2" J. Pharmacol. Exp. Ther.(in press). (1996)