T細胞レセプター・クロノタイプ検出システムの臨床検査化への試み

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557227
• 研究種目: 試験研究(B)
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 山本 一彦 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (80191394)
• 研究分担者: 塩川 左斗志 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (20215940) ; 江崎 一子 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (40037453)
• キーワード: T細胞レセプター / PCR / SSCP / T細胞 / 慢性関節リウマチ

研究概要

免疫応答の中心であるT細胞が抗原を認識する分子、すなわちT細胞レセプターに注目して、RT-PCR法とSSCP法を組み合わせることにより、リンパ球集団で集積しているT細胞クロノタイプを検出するシステムをすでに確立しており、多くの疾患において、その有用性を示してきた。今回は、このシステムをより簡単にして、数多くの検体を臨床検査のレベルで行えるようにすることを目的とした。従来、T細胞レセプターのベータ-鎖についてRT-PCRを行い、リンパ球集団におけるT細胞が発現しているほとんどのシグナルをカバーし増幅するには、20種類以上のPCRプライマーを必要としている。すなわち、一つの検体を解析するのに、20本以上のPCR反応を行い、それぞれをSSCP分析する必要がある。これが本クロノタイプ検出システムの臨床検査化を難しくしている第一の要因である。そこで今回、いくつかのコンピュータープログラムを用いて、SSCPに適した長さのDNAを増幅可能で、かつ複数のV領域のT細胞レセプターを同時にカバーできるプライマーを検索した。その結果、それぞれ2〜5のV領域に共通のプライマー配列が3個発見できた。そこでこれらの配列に基づいてプライマーを作成し、RT-PCRを行ったところPCR産物が増幅され、そのPCR産物をSSCP法で解析したところ、従来の方法と同様な分析が可能であることが示された。さらに慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患患者と健常人の末梢血リンパ球における集積T細胞クロノタイプをスクリーニングしたところ、前者は健常人と比べて明らかなT細胞の集積があることが判明し、このシステムが臨床検査のレベルで使用可能であることが示された。それぞれの新しいプライマーがカバーできるV領域の正確な範囲を、現在検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Komagata,Y.: "Clonal prevalence of T cells infiltrating into the pancreas of non obese diabetic(NOD)mouse with the progression of insulitis." Int Immunol.(in press).
• [文献書誌] Okubo,M.: "T cell epitope mapping of Ul-A ribonucleoprotein." Arthritis.Rheum.(in press).
• [文献書誌] Ikeda,Y.: "High frequencies of identical T cell clonotypes in synovial tissues of rheumatoid arthritis patients suggest the occurrence of common antigen-driven immune responses" Arthritis Rheum.(in press).
• [文献書誌] Masuko,K.: "Stable clonal expansion of cells induced by bone marrow transplantation." Blood.(in press).
• [文献書誌] Yamamoto.K.: "High frequencies of identical T-cell clonotypes accumulating in different areas of synovial lesions of rheumatoid arthritis patients" Proc.N.Y.Acad.Sci.756. 208-210 (1995)
• [文献書誌] Yamamoto,K.: "Accumulation of distinct T cell clonotypes in human solid tumors" J.Immunol.154. 1804-1809 (1995)