無毒性ジフテリア毒素の改変による腫瘍増殖因子抑制物質の作製

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557335
• 研究機関: 久留米大学
• 研究代表者: 目加田 英輔 久留米大学, 分子生命科学研究所, 教授 (20135742)
• 研究分担者: 三田村 俊秀 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (80268846) ; 馬田 敏幸 久留米大学, 分子生命科学研究所, 助手 (30213482) ; 岩本 亮 久留米大学, 分子生命科学研究所, 助手 (10213323)
• キーワード: ジフテリア毒素リセプター / ジフテリア毒素 / CRM197 / HB-EGF / EGFリセプター

研究概要

本研究は、ジフテリア毒素リセプターがHB-EGFと云うEGFリセプターに結合する増殖因子であること、ジフテリア毒素、あるいはその無毒性変異蛋白CRM197は、HB-EGFに結合することでそのEGFリセプターへの結合を阻害する事実に基づき、CRM197を改変することで、HB-EGF以外のEGFファミリーの増殖因子の特異的阻害剤の作成を目的としている。この目的のためにはCRM197側の解析はもちろんであるが、CRM197が結合するEGF因子側の解析も必須である。平成7年度の研究で、HB-EGFのジフテリア毒素結合部位について詳細な解析の条件が整ったので、CRM197の改変に先立ちHB-EGF側の解析を優先的に行った。HB-EGFのEGFドメインを改変した数多くのミュータントを作製し、これを細胞に発現させ、あるいは融合蛋白質として大腸菌で合成させ、そのプロダクトのジフテリア毒素結合活性、増殖促進活性を測定した。また、すでに報告されているEGFやTGF-αの立体構造を元にHB-EGFの立体構造を推定し、ジフテリア毒素の立体構造のデーターやミュータントの結果と重ね合わせて考察を行った。その結果、HB-EGFのジフテリア毒素結合部位、EGFリセプター結合部位について立体構造的にかなり具体的なイメージを得ることが出来、CRM197の改変に向けて大きく前進することが出来た。

研究成果

• [文献書誌] Tsuneoka,M.: "c-myc activates RCC1 gene expression through E-box elements." Oncogene. (in press).
• [文献書誌] Nakagawa,T.: "Amino-terminal processing of cell surface heparin-binding EGF-like growth factor upregulates its juxtacrine but not its paracrine growth factor activity." J.Biol.Chem.271. 30858-30863 (1996)
• [文献書誌] Nakamura,Y.: "Expression and distribution of CD9 in myelin of the central and perpheral nervous systems." Am.J.Pathol.149. 575-583 (1996)