キャピラリー電気泳動/エレクトロスプレー質量分析計インターフェースの試作

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07558219
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 千谷 晃一 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 教授 (60179942)
• 研究分担者: 綱澤 進 宝酒造株式会社, バイオ研究所, 副所長 ; 鈴木 政美 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 研究員 ; 谷口 寿章 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助教授 (10257636)
• キーワード: 質量分析 / キャピラリー電気泳動 / タンパク質 / 核酸 / 構造解析

研究概要

初年度に試作したコアキシャル型のキャピラリー電気泳動/エレクトロスプレー質量分析計インターフェースを、当研究所所有の三連四重極型エレクトロスプレー質量分析計(パーキンエルマ-サイエックス社製)のインターフェース部分に組み込み、キャピラリー電気泳動装置(ベックマン5010)とのオンライン分析を可能とした。本年度はさらに泳動条件の最適化、エレクトロスプレー・イオン化における使用溶煤などの選択を行ったが、これに加えて、イオン化効率の向上によるアトモルレベルへの高感度化を目指し、最近開発されたナノスプレー技術の導入を行った。この為にはインターフェース部分の改良が必要であるが、そのための基礎技術の開発の一環として、既に報告のあるマイクロインジェクション用ガラスキャピラリーを用いた、いわゆるナノスプレー法を確立すると共に、フェーズドシリカのキャピラリーをフッ化水素酸によりエッチングする方法、及び加熱してより細いキャピラリーを引くことで先端がおよそ数マイクロメーターの開口を持つフューズドシリカキャピラリーを作成した。これを用いてマイクロスプレー法の開発を行った。この結果、流速20-50nl/minという低流速で、安定したエレクトロスプレーを起こし、実用に耐える高感度エレクトロスプレー質量分析を可能とすることに成功した。今後CE/MSとしてオンライン分析するためには、電気泳動に使用するキャピラリーをより細いものとし、さらに先端部分をエッチングにより微少化することで目標を達成できるものと考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Yamauchi,E.,et al.: "The C-terminal conserved domain of marcks is phosphorylated in vivo by proline-directed protein linase: application of ion trap mass spectrometry to the determination of protein phosphorylation sites." J.Biol.Chem.273. 4367-4371 (1998)
• [文献書誌] Takeda,S.,et al.: "Structural and functional domains of the troponin complex revealed by limited digestion." Eur.J.Biochem.246. 611-617 (1997)
• [文献書誌] Saijo,Y.,et al.: "Production, cryatallization and preliminary X-ray analysis of rabbit skeletal muscle troponin complex consisting of troponin C and fragment (1-47) of troponin I" Protein Sci.6. 916-918 (1997)
• [文献書誌] Hayashi,N.,et al.: "Circular dichroism and ^1H nuclear magnetic resonance studies on the solution and membrane structures of Gap-43 calmodulin-binding domain." J.Biol.Chem.272. 7639-7645 (1997)
• [文献書誌] Taniguchi,H.,and Hayashi,N.: "A liquid chromatography/electrospray mass spectrometric study on the posttranscriptional modification of tRNA." Nucleic Acids Res.26. 1481-1486 (1998)