| 研究概要 |
本年度は原始的被子植物といわれている植物群の中からドクダミ(ドクダミ科),サラシナショウマ(キンポウゲ科),ヒツジグサ(スイレン科),コウホネ(スイレン科)の花のさまざまなステージをサンプリングし,各分類群においてRNAを抽出した.花形成遺伝子をRT-PCR法によりクローニングするために,既知の塩基配列を用いて保存的なアミノ酸配列であるMADS-boxを用いて増幅のためのプライマーを設計した.このプライマーにより3′RACE法により増幅されたDNA断片をプラスミドに組み込み目的のDNA断片をスクリーニングした.その後,DNA断片をRFLPによりタイピングし塩基配列を決定し,5′RACE法により上流域を増幅し,その塩基配列を基にして遺伝子の全領域のクローニングを行った。その結果,ドクダミ,サラシナショウマ,ヒツジグサ,コウホネでクラスCに属するシロイヌナズナのAG遺伝子の相同遺伝子を得ることができた.さらにヒツジグサではクラスBに属するPI遺伝子の相同遺伝子も得ている.また,それ以外の遺伝子も現在,スクリーニング中である.
クローニングできた遺伝子は全塩基配列の決定を行い,RT-PCRにより発現部位特異性の解析を行った。また,今回得られた塩基配列とすでに配列が決定されているMADS-box遺伝子をあわせて遺伝子系統樹を作成した。
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