| 研究課題/領域番号 |
07660361
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
川村 修 宮崎大学, 農学部, 助教授 (00041062)
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| 研究分担者 |
明石 良 宮崎大学, 農学部, 助手 (20253809)
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| キーワード | 牧草 / 消化性 / リグニン / 形質転換 / アグロバクテリウム / アンチセンス / シンナミルアルコールデヒドロゲナーゼ / バーズフットトレフォイル |
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| 研究概要 |
高消化性・褐色中肋型牧草の作出を目的として牧草の低リグニン化を目指し、以下の実験を行った。
1.アンチセンスCAD遺伝子の導入
ウドCADcDNAの塩基配列をもとに、PCRによって2つの制限酵素認識部位を連結したCADDNA断片を増幅した。そのDNA断片を、バイナリーベクターpGAH/SL-GUSに逆方向に配列するように挿入しプラスミドpGAH/anti-UCADを構築した。次いで、バーズフットトレフォイルの子葉にアグロバクテリウムを感染させて形質転換を行った。バイナリーベクターpGAH/SL-GUSを用いた形質転換での成功率は、培養29日目で平均23.7%で、その植物体再生率は17.3%でありpGAH/SL-GUSが有効であることが示唆された。一方、pGAH/anti-UCADでの耐性カルス形成率は20.3%であった。
2.導入遺伝子の確認と発現解析
耐性カルスから再生した植物体について導入遺伝子の確認をPCRで行った結果、プラスミドと同位置にバンドを認めることが出来た。またこれらの植物体のCAD活性は対照個体のそれより有意に低かった。現在、各植物体についてリグニンとアルデヒドの含量および消化率の測定を実施している。
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