LIMモチーフを有する新規プロテインキナーゼLIMKの機能解明

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07670149
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 水野 健作 九州大学, 理学部, 助教授 (70128396)
• 研究分担者: 原野 友之 九州大学, 理学部, 助手 (80037275)
• キーワード: プロテインキナーゼ / LIMK / TESK1 / LIMモチーフ / ジンクフィンガーモチーフ

研究概要

私たちは最近、LIMモチーフと呼ばれる特徴的なジンクフィンガー構造を分子内にもつ新規なプロテインキナーゼLIMK1のcDNAクローニングに成功した。LIMモチーフは転写因子、細胞接着班蛋白質などに見られるモチーフで蛋白質間の相互作用に関与しているといわれている。本研究では、LIMK1の細胞内での機能を明らかにするため、その発現分布、細胞内局在性、キナーゼ活性について検討し、以下の結果を得た。また、LIMK1と相同性の高いプロテインキナーゼをスクリーニングし、2種の新規なプロテインキナーゼのcDNAをクローニングした。
1)LIMK1と同じドメイン構成からなり、全体で約50%の相同性を持つLIMK2cDNAをトリ、ラット、ヒトcDNAライブラリーよりクローリングした。また、精巣に高発現し、キナーゼドメインでLIMKと高い相同性を持つが、LIMモチーフをもたず、C末端部にプロリンリッチ配列を持つ新規なプロテインキナーゼTESK1のcDNAをクローニングした。
2)LIMK1およびLIMK2をCOS細胞に発現させ、これらのキナーゼが主に細胞質に局在し、セリン/スレオニンキナーゼ活性を持つことを明らかにした。
3)A431細胞内でLIMK1に結合するチロシンリン酸化された分子量140Kの蛋白質pp140の存在を明らかにした。LIMモチーフは蛋白質間の相互作用を担っていることが示唆されているので、LIMK1はLIMモチーフを介してpp140と相互作用し、そのキナーゼ活性や細胞内局在性が調節されているものと推定される。

研究成果

• [文献書誌] Ohashi, K., et al.: "Molecular cloning and in situ localization the brain of rat Sky receptor tyrosine kinase." J. Biochem.117. 1267-1275 (1995)
• [文献書誌] Toshima, J. , et al.: "Autophosphorylation activity and association with Src family kinase of Sky receptor tyrosine kinase." Biochem. Biophys. Res. Commun.209. 656-663 (1995)
• [文献書誌] Ohashi, K., et al.: "Stimulation of Sky receptor tyrosine kinase by the product of growth arrest-specific gene 6." J. Biol. Chem.270. 22681-22684 (1995)
• [文献書誌] Nunoue, K., et al.: "LIMK-1 and LIMK-2, two members of a LIM motif-containing protein kinase family." Oncogene. 11. 701-710 (1995)
• [文献書誌] Okano, I., et al.: "Identification and characterization of a novel family of serine/threonine kinases containing two N-terminal LIM motifs." J. Biol. Chem.,. 270. 31321-31330 (1995)
• [文献書誌] Toshima, J., et al.: "Identification and characterization of a novel protein kinase, TESK1, specifically expressed in testicular germ cells." J. Biol. Chem.270. 31331-31337 (1995)