ヒトT細胞培養株におけるアポトーシス耐性機序の解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07670208
• 研究種目: 一般研究(C)
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 高橋 秀史 札幌医科大学, 医学部, 助手 (40231394)
• キーワード: T細胞 / アポトーシス / グルタチオン / CD95

研究概要

TNF receptorとFas分子は、細胞内構造が類似しており、細胞内シグナルの共通性が示唆される。TNFによる細胞死が、細胞内グルタチオン(GSH)の枯渇によって促進されるという報告があり、我々は、細胞内GSHと、Fas分子を介するアポ-シスの感受性について解析した。
ヒト白血病性T細胞株SUPT13,Jurkat,CCRF-CEM,及び、Fas抗原陽性であるが、抗Fas抗体非感受性であるそれらの変異株、さらに、ヒト末梢血単核細胞(PBL)を使用した。抗Fasモノクローナル抗体として我々が樹立した2D1を用いて、細胞内GSHの定量と比較検討した。
Fas非感受性である変異株では、オリジナル株に比べ細胞内GSHが有意に高濃度であった。BSO(Buthionine sulfoximine)やL-Cysteine/GSH free mediumを用いて、変異株の細胞内GSHを減少させると、Fas感受性が増加した。一方、NAC(N-acetyl cysteine)を用いて、Fas感受性であるオリジナル株の細胞内GSHを増加させると、Fas感受性が減少した。また、PBLの細胞内GSHを枯渇させると、そのFas感受性は増加する傾向があった。Fas抗原の発現は細胞内GSH濃度の変化に影響されないことをFACSにて確認した。これらの結果は、細胞内GSHがFas分子を介するアポトーシスのシグナル伝達に関与していることを示唆する(E.J.Immunol.in press)。

研究成果

• [文献書誌] Chiba,T.et al: "Fas-mediate apoptosis is modulated by intracellular glutathione in human T cells" Eur.J.Immunol.(印刷中). (1996)
• [文献書誌] Ikeda,H.et al: "Clonal dominance of human autologous cytotoxic T lymphocyies against gastric carcinoma:molecular stability of the CDR3 structure of the TCR α β gene." Int.Immunol.8. 75-82 (1996)
• [文献書誌] Takahashi,S.et al: "Immunohistochemical detection of estrogen receptor in invasive human breast cancer:Correlation with heat shock proteins,ps2 and oncogene products" Oncology. 52. 371-375 (1995)
• [文献書誌] Oguri-Hyakumachi,N.et al: "Selective depletion of cyclin-dependent kinases is associated with Fas-mediated apoptosis in human leukemia T cell lines" Int.J.Immunopharma col.17. 913-921 (1995)
• [文献書誌] Inoue,A.et al: "70-kDa heat shock cognate protein interacts directly with the N-terminal tegion of the retinoblastoma gene product pRb." J.Biol.Chem.270. 22571-22576 (1995)
• [文献書誌] Sato,T et al: "Detection of p53 gene mutation on aspiration biopsy specinens from suspected breast cancers by polynerse chain reaction-single strand contormation." Japan J.Cancer.Res.86. 140-145 (1995)