ヒト細胞の不死化過程に於けるp53,Sdi1,Cdk,Mdm2遺伝子の解析

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07670249
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 難波 正義 岡山大学, 医学部, 教授 (80069004)
• 研究分担者: 三原 浩一郎 岡山大学, 医学部, 助手 (50229788)
• キーワード: Human cells / Immortalization / Aging / p53 / cdk-kinase / mdm2 / p21

研究概要

ヒト正常線維芽細胞にヒト肺癌よりクローニングされたコドン273に変異のあるp53遺伝子を導入し,細胞の不死化が起こるかどうか検討した.その結果,細胞の分裂寿命の延長が認められ,多くの細胞に染色体の異常が起こったが,細胞は不死化しなかった.しかし,この細胞をX線あるいは4-ニトロキノリン1-オキサイド(4NQO)で処理すると不死化した.X線あるいは4NQOの処理のみでは細胞は不死化しなかった.
以上の実験結果は,変異p53は細胞の分裂寿命の延長と染色体異常の誘導にみられる遺伝子の不安定性を起こすが,p53の変異のみでは細胞の不死化には十分でないことが分かった.細胞の不死化には,X線や4NQOなどの処理により,さらに別の遺伝子の変異が必要なことも判明した.
不死化した細胞では,p21とmdm2の発現は著しく減少したが,p16の発現は不死化前と変わらなかった.cdk2,cdk4,cdk6,cyclin A,cyclin Dの発現は細胞の不死化前後で変わらなかったが,cdk2-kinase,cdc2-kinase活性は細胞が不死化すると上昇した.この活性上昇は,変異p53をもつ細胞では,p21の発現が減少しているので,その結果と考えられる.
以上のデータをまとめると,細胞の増殖を負に制御するp53遺伝子と,正に制御するcdk2-kinase,cdc2-kinase遺伝子群との,調整のとれた働きの乱れが,ヒト正常細胞を不死化させると推定される.

研究成果

• [文献書誌] Sugihara,S.,et al.: "Telomere elongation observed immortalized human fibroblasts by treatment with ^<60>Co gamma rays or 4-nitroquinolone 1-oxide." Hum.Genet.97. 1-6 (1996)
• [文献書誌] Iijima,M.,et al.: "Mutation in p53 and de-regulation of p53-related gene expression in three human cell lines immortalized with 4-nitroquinoline 1-oxide or ^<60>Co gamma rays." Int.J.Cancer. 66. 698-702 (1996)
• [文献書誌] Namba,M.,et al.: "Immortalization of cultured human fibroblasts with the mutant p53 gene and x-rays." Radiat.Oncol.Invest.3(6). 294-298 (1996)
• [文献書誌] Kondo,T.,et al.: "Two-dimensional electrophoretic studies on down-regulated intracellular transferrin in human fibroblasts immortalized by treatment with either 4-nitroquinoline 1-oxide or ^<60>Co gamma rays." Electrophoresis. 17. 1638-1642 (1996)
• [文献書誌] Fushimi,K.,et al.: "Trasformation of normal human fibroblasts into immortalized cells with the mutant p53 gene and x-rays." Int.J.Cancer. 70. 135-140 (1997)
• [文献書誌] Namba,M.,et al.: "Immortalization of human cells and its mechanisms." Critical Rev.Oncogenesis. (in press). (1997)