| 研究概要 |
先の我々の研究で、トキソプラズマの強毒株であるRH株には二種類のアイソザイム(NTPase-I,NTPase-II)が存在し、それらをコードする遺伝子の全核酸塩基配列が決定されている。また多数の株を用いたNTPaseの反応速度論的解析結果よりNTPase-IIは全ての株に存在するがNTPase-Iは強毒株にのみ存在することが推定されていた。今回、PCR法による遺伝子の増幅実験を行い、上記の現象はそれぞれのアイソザイムをコードする遺伝子の存在の有無と相関することがわかった。すなわち、弱毒株にはNTPase-Iをコードする遺伝子は存在せず、NTPase-IIをコードする遺伝子のみが存在することが新たにわかった。またmRNAを出さない疑似遺伝子が全ての株に存在すると思われていたが、この疑似遺伝子を持たない弱毒株の存在が新たにわかった。その後トキソプラズマの遺伝子のコスミドライブラリーよりNTPaseのプロモタ-領域を含む遺伝子をクローニングした。PCR法を用いて必要な各種の遺伝子断片を合成し、それら遺伝子断片を繋ぎ合わせ、機能する遺伝子として構築するための条件を検討した。Phlomycin耐性遺伝子を組み込んだプラスミドに構築した遺伝子を挿入し、生体内に組み込む実験を開始した。しかしながら、弱毒株にNTPase-Iを発現させることには成功していない。これはやはり疑似遺伝子が関与していると思われ、今回新たに見つかった疑似遺伝子を持たない弱毒株を用いて検討が必要と思われる。
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