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新たに開発した発現ベクターを用い、赤痢アメーバに対するヒトモノクローナル抗体の作製を試みた。また、ベクターの評価を目的に、マウスハイブリドーマを出発材料にし、大腸菌による抗赤痢アメーバマウスモノクローナル抗体の作製について検討した。
マウスFabの作製 赤痢アメーバに対するマウスモノクローナル抗体(κ型L鎖を持つIgG1)を産生するハイブリドーマよりmRNAを単離した。マウスFab増幅用のプライマーを作製し、γ_1型H鎖のFd領域とκ型L鎖をRT-PCRにてそれぞれ増幅した。増幅産物を組み込んだ発現ベクターから、ファージの外被蛋白をコードするG_<III>部分を除いて大腸菌に導入し、可溶性のFabとして発現させた。菌破砕上清は間接蛍光抗体法において赤痢アメーバ虫体と強く反応した。このFabは、in vitro系において赤痢アメーバのヒト赤血球に対する接触能と貪食能を有意に抑制できた。
ヒトFabの作製 赤痢アメーバに対して比較的高い抗体価を持つヒトのリンパ球から、mRNAを単離し、ヒトのH鎖(γ)とL鎖(κ、λ)のFab領域をコードする遺伝子の増幅を試みた。κ鎖に比べてλ鎖遺伝子の増幅効率は悪かったので、κ鎖とγ鎖をコードする遺伝子断片を発現ベクターに組込んで大腸菌にトランスフォームし、ヘルパーファージを感染させてファージディスプレイライブラリーを作製した。赤痢アメーバの粗抗原を用いて3回のパニングを行った後、G_<III>部分を除いて大腸菌に導入し、可溶性のFabとして発現させた。菌破砕上清の赤痢アメーバ粗抗原に対する反応をELISAにて検討したところ、弱陽性も含めると約半数のクローンが赤痢アメーバに対するヒト抗体を産生していた。
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