腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒の溶血機構の生化学的解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07670309
• 研究種目: 一般研究(C)
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 余 明順 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (70093482)
• 研究分担者: 飯田 哲也 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (90221746) ; 本田 武司 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (60029808)
• キーワード: 腸炎ビブリオ / 耐熱性溶血毒 / 溶血機構

研究概要

腸炎ビブリオ食中毒は、日本における食中毒原因菌の首位を占めるとともに、海外からの輸入感染症の原因菌としても高頻度に検出される下痢原性細菌である。主要病原因子と考えられる耐熱性溶血毒(TDH)の作用機構を解析する糸口として比較的解析し易い系として溶血機構を選び本研究の主題とした。本年度選られた研究実績は以下のとうりである。TDHを作用させるとヒト血球(TDHに対して溶血感受性)膜上で25kDa蛋白の特異的りん酸化が見られるが、mutant TDH(血球に結合はできるが、溶血活性は失ったTDH)を作用させても25kDa蛋白のりん酸化は誘導されないことが明らかになった。種々のprotein kinase inhibitorを用いて25kDa蛋白りん酸化の阻害実験を行った結果、protein kinase C inhibitorであるStaurosporineとCalphostin Cで著しく阻害され、25kDa蛋白のりん酸化にprotein kinase Cが大きく関与していることが示唆された。さらにこれらのprotein kinase C inhibitorはTDHによるヒト血球溶血活性をも著しく阻害することが確認でき25kDa蛋白のりん酸化と溶血との関係が裏付けられた。G蛋白との関係を調べるためにGTP γ Sの存在下でりん酸化実験をおこなったが非特異的に蛋白のりん酸化が強められたが、25kDa蛋白りん酸化の特異的促進は見られなかったため25kDa蛋白のりん酸化とG蛋白の関係については現時点では不明である。現在25kDa蛋白のcharacterizationのために二次元電気泳動でサンプルを収集中である。

研究成果

• [文献書誌] Yoh M.: "The binding of Vibrio parahaemolyticus 125I-labeled thermostable direct hemolysin to erythrocytes" Toxicon. 33. 651-657 (1995)
• [文献書誌] Tang G.: "Ca-independent cytotoxicity of Vibrio parahaemolyticus thermostable direct hemolysin (TDH) on intestine 407,a cell line derived from human embryonic intestine" FEMS Microbiol.Lett.134. 233-238 (1995)
• [文献書誌] Iida T.: "Isolation of mutant toxins of Vibrio parahaemolyticus hemolysin b in vitro nutage" Toxicon. 33. 209-216 (1995)
• [文献書誌] Yoh M.: "Evaluation of two assay kits for thermostable direct hemolysin (TDH) as an indicator of TDH-related hemolysin (TRH) produced by Vibrio parahaemolyticus" Microbiol.Immunol.39. 157-159 (1995)
• [文献書誌] Tang G.: "Amutant toxin of Vibrio parahaemolyticus thermostable direct hemolysin which has lost hemolytic activity but retains ability to bind to erythrocytes" Infect.Immun. 62. 3299-3304 (1994)
• [文献書誌] Xu M: "Construction and characterization of an isogenic mutant of Vibrio parahaemolyticus having a deletion in the thermostable direct hemolysin-related homolysin gene (trh)" J.Bact.176. 4757-4760 (1994)