| 研究概要 |
1.Fur遺伝子のクローニングと解析:他菌種のfur塩基配列を参考にして作成したプライマーを用い,本菌におけるfur PCR産物を得た。RIラベルしたPCR産物をプローブとしてサザーン分析し,furをクローン化した。しかし,塩基配列を決定したところ,fur全遺伝子をコードしていないことが判明したので,下記の腸炎ビブリオFur欠損株や大腸菌Fur欠損株を相補することに基づいて,全遺伝子をクローニングするとともに,発現されるFur蛋白を精製すべく検討中である。
2.Fur欠損株の作成:Mn耐性株をスクリーニングし,それらの中からvibrioferrin産生やレセプター蛋白が脱鉄制御された株を得た。1)及び2)の結果から本菌におけるFurレギュロンの存在が明らかとなった。
3.Fur(鉄欠乏)と溶血毒遺伝子発現との関連性の解明:本菌種には耐熱性溶血毒(TDH)とその類似溶血毒(TRH)を産生する株が存在する。それぞれの溶血毒のみを産生する株と,それらから選抜したFur欠損株について溶血毒産生量を求めた。親株はいずれも鉄欠乏時にTDHあるいはTRHの産生が顕著に増加した。さらに,Fur欠損株では鉄豊富時にも溶血毒の産生の増加が認められ,本毒素遺伝子の発現がFurレギュロンの一環であることが判明した。特に,TRHの産生はより強く鉄制御されている可能性が示された。既に塩基配列の決定されているそれぞれの遺伝子を解析し,プロモーター領域にFur box様配列を認めた。さらに,最近報告された本菌のプロテアーゼ遺伝子にもFur box様配列が認められたので,上記作成菌株を用いてプロテアーゼ産生の鉄制御機構についても検討を広げる予定である。
4.鉄制御外膜レセプター蛋白欠損株の作成:機能的にヘミン鉄を利用できない変異株を多数選抜したが,ヘミン鉄レセプター欠損株はまだ得られていない。Vibrioferrin-鉄レセプター欠損株の作成と併せて,方法論の変更が望ましく,現在鋭意検討中である。
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