| 研究概要 |
我々はC型インフルエンザウイルスM遺伝子からコードされるイオンチャネル候補蛋白である18kDaの蛋白質(CM2)を感染細胞内に検出することに成功した(J.Gen.Virol.75,3503,1994)。平成7年度はCM2蛋白の性状解析を進めて以下の成績を得た。
1)CM2は翻訳直後は16kDaであり、これに1本の高マンノース型糖鎖が付加され18kDaに変化し、さらに糖鎖が複合型に成熟することにより22〜30kDaの分子量を持つに至る。
2)合成後間もなくS-S結合による2量体を形成し、その一部はさらにS-S結合により4量体を形成する。
3)^3H-パルミチン酸の取り込み実験から、22〜30kDaのCM2に脂肪酸の付加が認められた。
4)感染細胞から調整したミクロソーム分画を、トリプシンで処理したのちRIPにより解析すると、CM2は膜貫通ドメインよりC側の領域に対する抗体との反応性を失った。また非固定の感染細胞を間接蛍光抗体法で解析すると、C側の領域に対する抗体は細胞表面を蛍光染色できなかった。いずれもC側領域が細胞質ドメインを形成することを示唆する成績であった。
5)大量に調整した精製ウイルス蛋白を抗CM2血清を用いたWestern blot(WB)法で解析し、22〜30kDaの蛋白を検出することに成功した。さらに、精製ウイルス蛋白をN-glycanase Fで処理することにより、22〜30kDaのCM2は16kDaの均一な泳動を示す蛋白として捉えられた。以上のWB法の成績からウイルス粒子上に相当量のCM2蛋白が存在することが明らかになった。
今後はCM2蛋白の翻訳機序を解析する予定である。
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