| 研究概要 |
陳旧化した骨髄組織からの個人識別をする目的で,PCR法を用いた性別判定ならびにSTR型の分析を行い,変性したDNAを試料とした場合の最適なDNA多型検査法を検討した.
剖検時採取した胸骨柄38検体を2週間から36カ月間外気中に放置後,骨髄からDNAを精製した.
1.性別判定では,アメロゲニン遺伝子からの2種類のbpの異なるプライマーを用い比較検討した.長いbpのAMGLでは,1回目のPCRでは18例が性別判定が可能であった.判定不能例については低分子物質の除去後,BSA添加によるPCRを行い,さらにDualPCRを試みたが10例がなお判定不可能であった.次に短いbpのAMGLでは,1回目のPCRにおいて25例が判定でき,さらに低分子物質の除去ならびにBSAを添加しPCRを行ったところ全例において性別判定が可能であった.これらのことから,陳旧化したDNAから性別判定を行うには,低分子物質の除去後,BSA添加等のDNA側の前処理を行うと共に短いbpのプライマーを設計する必要がある.
2.STR型の検索にはvWFならびにTH01を用い,先の陳旧化した骨髄DNAと剖検時同一個体から採取した血液DNAとが一致した結果となるかを検討した.前処理を行わない段階でのPCRでは,増幅産物が得られなかったものが性別判定と同様13例あったが,処理済みのDNAからは全例その増幅したバンドが得られ,陳旧化骨髄DNAと血液DNAとは全く矛盾しない結果が得られた. vWF,TH01共に短いbpのプライマーであることから陳旧化したDNAから個人識別を行う場合には,DNA側ならびにプライマー側双方とも検出感度をあげる必要がある.
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