肝内マクロファージ(Kupffer細胞)由来活性酸素による肝癌細胞障害機序の解明共焦点レーザー顕微鏡を用いた検討を中心として

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07670613
• 研究種目: 一般研究(C)
• 研究機関: 慶応義塾大学
• 研究代表者: 黒瀬 巌 慶應義塾大学, 医学部・内科, 助手 (50234604)
• 研究分担者: 三浦 総一郎 慶應義塾大学, 医学部・内科, 講師 (50138012) ; 加藤 真三 慶應義塾大学, 医学部・内科, 講師 (30177448) ; 斎藤 英胤 慶應義塾大学, 医学部・内科, 講師 (80186949)
• キーワード: Kupffer細胞 / 活性酸素 / Nitric Oxide (NO) / TNF-α / 肝癌 / ミトコンドリア / アポトーシス / 共焦点レーザー顕微鏡

研究概要

本年度においては、Kupffer細胞によるNO・TNF-α放出動態と肝癌細胞障害・アポトーシスとの時間的空間的相関およびその制御機構を解明してきた。すなわちKupffer細胞と肝癌細胞の共培養系におけるNOおよびTNF-α産生動態の定量と、肝癌細胞内ミトコンドリア呼吸能の変化、細胞膜・核膜障害、DNA fragmentation化を共焦点レーザー顕微鏡下に可視化、定量するシステムを確立したNO・TNF-α合成系の関与を裏付けるためにinducible NO synthase (iNOS) mRNAおよびTNF-αmRNAに対するアンチセンスプローブを用いて抑制実験を行なったほか、fluorescence in situ hybridization (FISH)法を応用し培養細胞内iNOSおよびTNF-αmRNAの誘導を確認した。さらに各種接着因子(ICAM-1、CD18等)に対するモノクローナル抗体を用いて上述の実験系に対する抑制実験を行った。以上の結果、肝癌細胞とのICAM-1、CD18を介した接着によりKupffer細胞のNO・TNF-α合成が増加し、肝癌細胞にnecrosisのみならずapoptosisが惹起されることが明らかとなった。

研究成果

• [文献書誌] Kurose I, et al: "Nitric oxide mediates motochondrial dystunetion inhepctone" J. Gatsroeuterol Hepotol. 10. S68-S71 (1995)
• [文献書誌] Kurose I, et al: "Rat Kupffer cell-derived nitric oxide woolulates" Gastroenterology. 109. 1958-1968 (1995)
• [文献書誌] Kurose I, et al: "Microvascular vesponses to inhibitor of nitric oxide" Circ Res. 76. 30-39 (1995)
• [文献書誌] Kurose I, et al: "Effects of an endoglnous inhibitor of nitric oxide" Am J. Physiol. 268. H2224-H2231 (1995)
• [文献書誌] Kurose I, et al: "Inhibitions of platelet-octivating factor production" Pathophysiology. 2. 153-159 (1995)
• [文献書誌] Miura S. et al: "Intravital demonstration of sequential migration" Gastroenterology. 109. 113-1123 (1995)
• [文献書誌] Henninger DD, et al: "Nitric Oxide: A Moduletor of Cell-Cell Interaction" Nitric oxide as a medictor of leukouyte fametion, 28 (1995)