| 研究課題/領域番号 |
07670906
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(C)
|
| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
|---|
研究代表者 |
斎藤 加代子 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (90138834)
|
|---|
| 研究分担者 |
近藤 恵里 東京女子医科大学, 小児科, 助手
池谷 紀代子 東京女子医科大学, 小児科, 助手 (70151313)
|
|---|
| キーワード | Duchenne型筋ジストロフィー / 骨格筋細胞培養 / アデノウイルスベクター |
|---|
| 研究概要 |
1)Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)およびBecker型筋ジストロフィー(BMD)患者よりインフォームドコンセントの下に、筋生検や剖検によって得られた骨格筋細胞15例より直接RNAを調整した。これらの患者のリンパ球において、ジストロフィンDNAの変異を調べ、変異を挟むプライマーを設計し、nested-PCRを実施した。その結果、DMDの2例において、mRNAは増幅されなかった。mRNAが増幅された13例において、PCR産物からの直接的塩基配列決定を行った。その結果1例において、エクソン内における欠失とミスセンス変異が証明された。BMDの5例ではreading frameを保持して、遺伝子変異を生じており、蛍光抗体法にてジストロフィンは不連続性に認められ、ウエスタンブロット法にてサイズの小さいジストロフィンの発現を認めた。
2)DMD患者の筋生検時に得られた骨格筋細胞を培養し、骨格筋細胞クローンを樹立した。線維芽細胞、筋線維間結合織細胞も一次培養して凍結保存した。
3)培養骨格筋細胞において、導入した外来遺伝子の発現をみる基礎実験を開始している。現在、アデノウイルスベクターにβ-galactosidase遺伝子を組み換え、293細胞にて増殖させている。
|
