| 研究課題/領域番号 |
07671192
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
村手 隆 名古屋大学, 医学部, 講師 (30239537)
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| 研究分担者 |
伊藤 達也 名古屋大学, 医学部, 医員
木下 朝博 名古屋大学, 医学部, 助手 (60283446)
堀田 知光 東海大学, 医学部, 教授 (70173606)
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| キーワード | IL-3 / MB-02 cell / eosinophilic differentiation / transcription factor |
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| 研究概要 |
GM-CSF依存性細胞株MB-02におけるIL-3での好酸球分化を解析する目的で、更にIL-3receptor αを遺伝子導入したMB02-IL3Rα株を作成したところ、IL-3の濃度に応じてMB-02同様の好酸球分化を示した(投稿準備中)。培養面での有利さからこのMB02-IL3Rα株を材料として、本年度は好酸球特異的転写調節因子の解析を開始した。GM-CSF及び各濃度のIL-3で刺激したMB02-IL3Rα株の核蛋白を作成した。既報eosinophilperoxidaseの5'側のプロモーターfragmentをPCR法にて作成しgel shift assayにてこの領域に結合する蛋白を検索した。特に低濃度のIL-3刺激時(好酸球分化誘導条件)の変化に着目したが、予備実験では著明な変化を認めなかった。現在さらに領域を拡げてプロモーター及びエンハンサーに結合する分化特異的蛋白の候補を検索中である。他の好酸球特異形質であるeosinophil major basic protein(MBP)についても同様の検索を始めるべく検討中である。MBPのプロモーターは最近の報告によればP1とP2の2種類存在するとされているため、MB02-IL3Rα株でのMBP trans criptionについてどちらが有意か決定した後、PCR法にてプローブを作成し同様に実験を行いたい。
一方、今年度の研究計画書にも述べた如く、プロモーターないしエンハンサーを用いたDNAaffinityカラムでの分化特異的蛋白の同定の試みについても、現在カラム作成等の基礎実験を開始した。方法論的に問題がなければ一般的プロモーターでの予備実験を開始する予定である。
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