| 研究課題/領域番号 |
07671204
|
|---|
| 研究機関 | 大阪大学 |
|---|
研究代表者 |
谷 慶彦 大阪大学, 医学部, 助手 (10252652)
|
|---|
| 研究分担者 |
仲野 徹 大阪大学, 微生物研究所, 教授 (00172370)
佐々木 浩一 大阪大学, 医学部, 医員
小守 壽文 大阪大学, 医学部, 助手 (00252677)
|
|---|
| キーワード | ジーンターゲティング / CD34 |
|---|
| 研究概要 |
1.ES細胞の同定
CD34遺伝子の膜貫通部のエクソンをneo耐性遺伝子に置換したターゲティングベクターを電気穿孔法にてES細胞に導入し、G418、ガンシクロビルによる二重選択で相同組み換えを起こしたES細胞をPCR法およびSouthern法により確認し、変異ES細胞を樹立した。さらにG418の濃度を上げ、両染色体で相同組み換えを起こした(ダブルノックアウトされた)変異ES細胞も樹立した。
2.ノックアウトマウスの作製
変異ES細胞を微注入法によりマウスのblastcystに入れ、現在キメラマウスを作製中である。今後、このキメラマウスと正常マウスを交配させFIヘテロ接合マウスを作製し、F1ヘテロ接合マウス同志を交配させ、目的とするCD34遺伝子の欠損したマウスを得る予定である。そしてそのマウスを使って、in vivoでのCD34分子の機能について解析していく。
3.in vitroでの解析
CD34遺伝子がダブルノックアウトされた変異ES細胞とM-CSFが欠損したマウスより樹立されたストロマ細胞株、OP-9とを共培養し、現在、その変異ES細胞の各血球系への分化能およびコロニー形成能を解析しているところである。
|
