| 研究概要 |
【背景】アルポート症候群の大部分はX連鎖型で、X染色体上に存在するIV型コラーゲンα^5遺伝子の変異により起こると考えられている。これまでゲノムDNAを用いたSSCP法にて遺伝子解析がされているが、変異の検出率は50%以下である。この低検出率の原因として、ゲノムDNAレベルでは検出困難な変異の存在とSSCP法の感度の低さが考えられる。
【目的】mRNAレベルでのダイレクトシークエンス法による遺伝子解析法を開発し、X連鎖型アルポート症候群の遺伝子診断法を確立する。
【対象・方法】糸球体・皮膚基底膜α^5鎖蛋白の異常を認めたX連鎖型アルポート症候群22家系22例(男児13例、女児9例)を対象とし,末梢血白血球からRNAを抽出しRT-PCR・ダイレクトシークエンス法によりIV型コラーゲンα^5鎖全遺伝子を解析した。
【結果・考察】RT-PCR・ダイレクトシークエンス法によりIV型コラーゲンα^5鎖mRNA全域の解析が可能であった。その結果、男児は13例全例(100%)、女児は9例中7例(78%)で遺伝子変異がみつかり、全体の検出率は91%と極めて高率であった。変異の発見できなかった女児では、正常なRNAのみがPCRで増幅された可能性が考えられ、再検中である。
【結論】RT-PCR・ダイレクトシークエンス法によるRNAレベルでの遺伝子解析は、X連鎖型アルポート症候群の遺伝子診断法として高感度で実用的な方法である。
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