| 研究概要 |
平成8年度は以下の実験を行った。1:RT-PCRによって得られたcDNAがヒトVEGFの塩基配列をcodeしていることをsequenceによって確認した。
2:塩基配列を確認したヒトVEGF165 cDNAをEBV発現vector(pCEP4)に組み込んだ。
3:ヒトVEGF165 cDNAを組み込んだ発現vector(pCEP4 antisense VEGF)と、何も組み込んでいないvector(pCEP4 alone)とをリン酸カルシウム沈殿法にてヒトglioma細胞株;T98G,U87MG,U138MG,PNET,(当科にて手術、培養したprimitive neuroectodermal tumor)にtransfectした。
4:Hygromycin Bにて細胞を選択し、pCEP4 antisense VEGF細胞、pCEP4 alone細胞、何も導入していない正常細胞の3者間でin vitroでの成長を比較した。
結果:1:RT-PCRの産物を電気泳動するとバンドは3本見られた。この3本のバンドをそれぞれsequenceすると、2本は不完全な塩基配列で、1本のみVEGF165を完全にcodeしていた。従ってVEGF165 cDNAを発現vectorに組み込んだ。
2:pCEP4 antisense VEGF細胞、pCEP4 alone細胞、正常細胞の形態を観察すると3者に違いは認めなかった。
3:この3者のin vitroでの成長を成長曲線にて比較すると、pCEP4 antisense VEGF細胞で成長が遅れる傾向があった。
結論:antisense VEGFは腫瘍の成長を抑制する可能性を示唆した。
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