| 研究概要 |
Wister rat(生後14〜16週,375〜423g,雄)を用い,全麻下に第8〜10胸椎の椎弓切除を行った。Blackらの方法に準じて,120gの重錘にて2分間第9胸髄を硬膜上より圧迫し,脊髄不全損傷モデルを作成した。
損傷3時間後,6時間後,12時間後,24時間後,48時間後,72時間後,7日後に,それぞれ2匹ずつ全麻下にホルマリンにて灌流固定を行った後,断頭瀉血した。損傷脊髄を含めた胸髄を一塊として摘出した後,水洗し,パラフィンにて包理した。
損傷中心部より頭側,尾側に2mmずつ組織を横断薄切し,Hematoxylin-Eosine(以下HE)及びNick-end-label法にて染色した。
HEにて神経細胞死の形態学的特徴を,Nick-end-label法にてその生化学的特徴を検討し,損傷部および周辺脊髄組織におけるapoptosisの有無を観察した。
脊損3時間後のHE染色標本では,損傷中心部は,神経細胞の核及び細胞体とも崩壊する著明なnecrosisの所見が認められた。この損傷中心部にみられたnecrosisの所見は時間の経過とともに進行していった。
損傷中心部より頭側に12mmの部位では損傷3時間後から6時間後まで神経細胞死は観察されなかったが,損傷12時間後にはnecrosisとは明らかに異なる,Nissl小体が比較的保たれ,核が一様に濃染する神経細胞死の所見が散見された。しかし,脊損72時間後には,細胞の核の境界が不鮮明となり脊損後12時間後より認められた所見は消失していた。
Nick-end-label法標本では,損傷6時間後までいずれの部位にても神経細胞の核は染色されなかった。脊損後12時間後には損傷中心部では染色されなかったが,中心部より頭側に12mmの部位にて神経細胞の核は発色し,HE染色標本の所見と合わせてapoptosisが示唆された。
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