| 研究課題/領域番号 |
07671745
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
武田 光正 横浜市立大学, 医学部, 講師 (70244499)
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| 研究分担者 |
木下 裕三 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (00186298)
穂坂 正彦 横浜市立大学, 医学部, 教授 (30106330)
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| キーワード | アンドロゲン / アンドロゲン応当遺伝子 / アンドロゲンレセプター |
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| 研究概要 |
1)ラットアンドロゲンレセプター(AR)のDNA結合領域(AR-DBD)301bpをPCRにより合成し、これをpET156.ベクターに組込み、Hig-tagとの融合蛋白として大量に発現た。ニッケルカラムを用いて95%以上の純度のAR-DBD融合蛋白を精製した。
2)ゲルシフトアッセイにより、精製したAR・DBD蛋白がアンドロゲン結合性配列(ARE)に特異的に結合することを確認し、その至適条件を決定した。
3)ラットゲノムDNAをBamHI,PstIを用いて500〜2000bpに断片化し、このDNA断片とAR-DBD蛋白質をin vitroで結合させ、ニトロセルロースフィルターを用いて、一端AR-DBD蛋白質と結合するDNA断片のみを取り出し、これをプラスシドに組込みライブラリーを作製した。大腸菌にトランスフォームし増した。以下プラスシドに組込んだDNAとAR-DBD蛋白質を結合させ、ニトロセルロースフィルターで選択し、プラスシドを増延させるという選択-増延のサイクルを6回くり返すことにより、AREに特異的に結合するDNA断片を7個得た。
4)以上の成果は第3回ステロイドホルモン研究会(平成7年11月25日、東京)における「シンポジウム-増延因子-癌遺伝子」にて発表した。
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